جداسازی و شناسایی enterobacter از گره ریشه سنجد در ایران

چکیده: سنجد (elaeagnus angustifolia l.) یا زیتون روسی گونه‌ای با ویژگی‌های اقتصادی، زینتی و ارزش اکولوژیکی بالایی است. این گیاه بومی آسیا مرکزی و شرقی و جنوب اروپا بوده و همچنین در کانادا و غرب ایالات متحده یافت می‌شود. به‌منظور شناسایی باکتری‌های همراه گرهک‌های ریشه در تابستان 1399 از گره‌های ریشه درخت سنجد در شهرستان رفسنجان (استان کرمان) نمونه‌برداری شد. نمونه‌ها به آزمایشگاه منتقل و پس از شست‌وشو با آب معمولی و ضدعفونی سطحی با سدیم هیپوکلریت 1 درصد چندمرتبه با آب مقطر سترون شسته شدند. گره‌ها به طور جداگانه در یک تشتک پتری حاوی مقداری آب مقطر سترون به کمک تیغ خرد و قطراتی از سوسپانسیون حاصله به‌صورت مخطط روی پتری­های حاوی محیط روی محیط کشت آگار غذایی حاوی سوکروز 1 درصد (sna) و yma (عصاره مخمر، مانیتول، آگار) کشت گردید. پرگنه­های باکتریایی 4 تا 5 روز پس از نگهداری پتری‌ها در دمای 25 تا 28 درجه سلسیوس روی محیط کشت ظاهر شدند. همه جدایه­ها گرم منفی و فقط قادر به رشد در دمای 35 درجه سلسیوس بودند. dna ژنومی جدایه­ نماینده استخراج و در واکنش زنجیرهای پلیمراز جهت تکثیر ناحیه 16s rrna استفاده شد. توالی نقطه تکثیر شده با ارسال نمونه‌ها به شرکت ماکرو ژن (کره جنوبی) تعیین شد. در مقایسه توالی به‌دست‌آمده ناحیه 16s rrna(شماره دسترسی: (or672976 با توالی‌های موجود در ,ncbi جدایه­ به­دست­آمده در این مطالعه بیشترین شباهت را به enterobacter نشان دادند. این اولین گزارش از جداسازی enterobacter از گره ریشه سنجد در ایران است.

isolation of enterobacter strains from elaeagnus angustifolia root nodules in iran

elaeagnus angustifolia l., also known as russian live or oleaster, is a species with multiple traits of economic, ornamental, and high ecological value. it is native to central and eastern asia, southern europe and can also be found in canada and the western part of the united states. during the summer of 2020, naturally occurring nodules on the roots of russian olive trees were collected in rafsanjan county (kerman province, southeast of iran) and directly used for bacterial isolation. briefly, samples were carefully rinsed to eliminate any possibly trapped pockets of soil. the nodules were surface disinfected by immersion in 1% (v/v) sodium hypochlorite for 4 min and rinsed several times with sterile distilled water (sdw). nodules were then individually crushed in drops of sdw and the resulting suspension was streaked on nutrient agar containing 1% sucrose (sna) and yeast mannitol agar (yma) in petri dishes. colonies appeared after 4-5 days of incubation at 25-28°c. they were checked for purity by repeated streaking on sna medium. all the bacterial isolates were gram negative and grew only at 35°c. genomic dna was extracted from representative isolate and used for pcr amplification of a fragment of the 16s rrna, using primers fd1/rd1. the amplicons were sequenced by macrogen company in south korea. the sequence (genbank accession number: or672976) were compared with those present in genbank using the blast algorithm. the isolated strain showed the highest similarity (100%) with enterobacter. this is the first report on isolation of enterobacter from russian olive root nodules in iran.