ساخت سازواره ژنی برای همسانه‏سازی بتاگلوکاناز در باکتری لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس

زمینه و هدف: پلی‏ساکارید غیرنشاسته بتاگلوکان از اجزای دیواره سلولی آندوسپرم غلات است که یک عامل ضد تغذیه‌ای بوده و با ایجاد شرایط چسبنده در روده، هضم و جذب سایر مواد مغذی را در پرندگان به طور منفی تحت تاثیر قرار می‏دهد و مدفوع پرندگان را بسیار مرطوب و چسبناک می‏کند. لذا هدف این تحقیق ساخت سازواره ژنی جهت انتقال ژن کد کننده آنزیم بتاگلوکاناز در باکتری فلور روده پرنده انتخاب گردید. مواد و روش ها: در این تحقیق ژن کد کننده آنزیم بتاگلوکاناز (ec 3.2.1.73) با استفاده از واکنش زنجیره‏ای پلیمراز از ژنوم باکتری باسیلوس سوبتلیس جداسازی و تکثیر گردید و به روش همسانه سازی t/a در حامل pgem-t easy کلون و به درون اشیریشیاکلی ترانسفورم گردید. همچنین توالی فرادست و فرودست ژن slp از لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس نیز به صورت جداگانه در پلاسمید pgem همسانه سازی شدند. سپس سه ژن به روش ساب کلونینگ به ترتیب فرادست-بتاگلوکاناز-فرودست در پلاسمید pet32 همسانه سازی شد. یافته ها: تائید صحت کلون ژن‏ها با دو روش pcr و هضم آنزیمی مورد بررسی گرفت. و صحت ساب کلونینگ با روش‏های pcr و هضم آنزیمی با آنزیم‏های xhoi و xbai مورد ارزیابی و تایید قرار گرفت.نتیجه گیری: سازه ژنی حاصل این امکان را فراهم می‏آورد که در تحقیقات آینده بتوان ژن بتاگلوکاناز را درون ژنوم باکتری لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس به روش نوترکیبی همسان درج نمود.

generation of gene constract to insertion of beta-glucanase gene in lactobacillus acidophilus bacteria

background: non-starch polysaccharide beta-glucan is one of the components of the cell wall of cereal endosperm, which is an anti-nutritional agent and by creating sticky conditions in the intestine, it negatively affects the digestion and absorption of other nutrients in birds, and feces it makes the birds very moist and sticky. therefore, the goal of this research was to construct a gene system for the transfer of the gene encoding the beta-glucanase enzyme in the intestinal flora of birds. materials and methods: in this research, the gene coding for beta-glucanase enzyme (ec 3.2.1.73) was isolated and amplified from the genome of bacillus subtilis bacterium using polymerase chain reaction, and by t/a homogenization method in pgem-t carrier. easy was cloned and transformed into escherichia coli. also, the upstream and downstream sequences of the slp gene from lactobacillus acidophilus were also cloned separately in pgem plasmid. then three genes were homogenized by subcloning in the order of upstream-beta-glucanase-downstream in pet32 plasmid. results: confirmation of the authenticity of gene clones was investigated by two methods, pcr and enzyme digestion. and the correctness of subcloning was evaluated and confirmed by pcr methods and enzyme digestion with xhoi and xbai enzymes. conclusion: the resulting gene structure makes it possible to insert the beta-glucanase gene into the genome of lactobacillus acidophilus by homologous recombination in future research.