بررسی بیان lncrnaهای pca3، malat1 و gas5 در سلول‌های pc3 ترانسفکت شده با ژن کد کننده dermaseptin-b2

سابقه و هدف: سرطان پروستات شایع‌ترین سرطان بین مردان در جهان است. این سرطان دومین سرطان شایع پس از سرطان ریه و سومین عامل مرگ و میر ناشی از سرطان در کشورهای پیشرفته می‌باشد. تنظیم میزان بیان lncrna نقش مهمی در آپوپتوز و کنترل سرطان پروستات دارد. rnaهای بلند غیر کدکننده pca3، malat1 و gas5 در القای آپوپتوز نقش دارند. توسعه داروهای جدید ناشی از اکتشاف تنوع زیستی می‌تواند جایگزین‌های درمانی جدیدی را ایجاد کند. dermaseptin-b2، یک پپتید ضد میکروبی طبیعی است که از پوست قورباغه آمازون جدا می‌شود و دارای فعالیت ضد توموری است. مطالعه حاضر اثرات تیمار با pcdna3.1-dermaseptin-b2 بر تغییرات سطح بیان ژن‌های pca3 ، malat1 و gas5 در سلول‌های pc3انکوبه شده با سازواره نوترکیب و سازواره فاقد ژن هدف را توصیف می‌کند.مواد و روش‌ها: توالی ژن کد کننده dermaseptin-b2 از سایت ncbi گرفته شد و با کمک سایت‌های addgene و snapgene در وکتور بیانی pcdna3.1(+) کلون شد. باکتری اشریشیا کلی سویه top10f توسط پلاسمید نوترکیب pcdna3.1(+)-dermaseptin-b2 ترانسفورم شد. پس از تکثیر پلاسمید نوترکیب در باکتری، خالص سازی آن انجام گرفت. رده سلول‌های سرطانی pc3 به کمک کیت لیپوفکتامین 2000 توسط وکتور نوترکیب و وکتور فاقد ژن هدف ترانسفکت شد. از سلول‌های ترانسفکت شده استخراج rna صورت گرفت و cdna سنتز شد. سطح بیان ژن‌های pca3 ، malat1 و gas5 با روش real-time rt-pcr و محاسبه δδct تعیین شد. در مطالعه حاضر مقدار p کوچکتر از 05/0 به لحاظ آماری معنی‌دار در نظر گرفته شد. یافته‌ها: نتایج حاصل از مطالعه حاضر نشان داد که تیمار با pcdna3.1- dermaseptin-b2 پس از انکوباسیون 24 ساعته در دمای 37 درجه سانتی گراد، سطح بیان ژن pca3 که در مهار تکثیر چرخه سلولی دخیل است را به طور معنی‌داری کاهش داد (p˂0.01) شد. از طرفی تیمار با pcdna3.1-dermaseptin-b2باعث افزایش بیان معنی‌دار ژن‌ gas5 (p˂0.001) و همچنین کاهش بیان معنی‌دار ژن malat1 که در القای آپوپتوز نقش دارد، گردید (p˂0.0001). تیمار رده سلولی pc3 با وکتور فاقد ژن هدف هیچ گونه تغییر معنی‌داری را نسبت به گروه شاهد نشان نداد.نتیجه‌گیری: پژوهش حاضر تایید می‌کند که pcdna3.1-dermaseptin-b2 با تنظیم بیان ژن‌های pca3، malat1 و gas5 آپوپتوز را القا می‌کند. نتایج این مطالعه به استفاده از dermaseptin-b2به عنوان یک فاکتور درمانی پیشنهادی برای کاهش پیشرفت سرطان پروستات کمک می‌کند.

examining the expression of lncrnas pca3, malat1 and gas5 in pc3 cells transfected with the gene encoding dermaseptin-b2

background: prostate cancer is the most common cancer among men in the world. this cancer is the second most common cancer after lung cancer and the third cause of cancer deaths in developed countries. regulation of lncrna expression plays an important role in apoptosis and control of prostate cancer. long non-coding rnas pca3, malat1 and gas5 are involved in apoptosis induction. the development of new drugs resulting from the discovery of biodiversity can create new therapeutic alternatives. dermaseptin-b2, a natural antimicrobial peptide isolated from the skin of the amazon frog, has antitumor activity. the present study describes the effects of treatment with pcdna3.1-dermaseptin-b2 on changes in the expression level of pca3, malat1 and gas5 genes in pc3 cells incubated with the recombinant and free vector.materials and methods: the sequence of the dermaseptin-b2 coding gene was obtained from the ncbi site and cloned into the expression vector pcdna3.1(+) with the help of addgene and snapgene sites. escherichia coli strain top10f was transformed by pcdna3.1(+)-dermaseptin-b2 recombinant plasmid. after multiplying the recombinant plasmid in bacteria, its purification was done. pc3 cancer cell line was transfected with the help of lipofectamine 2000 kit by recombinant vector and vector without the target gene. rna was extracted from the transfected cells and cdna was synthesized. the expression level of pca3, malat1 and gas5 genes was determined by real-time pcr method and δδct calculation. in the present study, p value smaller than 0.05 was considered statistically significant.results: the results of the present study showed that treatment with pcdna3.1-dermaseptin-b2 after 24-hour incubation at 37 ℃ significantly reduced the expression level of pca3 gene, which is involved in the inhibition of cell cycle proliferation (p˂0.01). became. on the other hand, treatment with pcdna3.1-dermaseptin-b2 caused a significant increase in the expression of the gas5 gene (p˂0.001) and also a significant decrease in the expression of the malat1 gene, which plays a role in apoptosis induction (p˂0.0001). treatment of pc3 cell line with the vector lacking the target gene did not show any significant changes compared to the control group.conclusion: the present study confirms that pcdna3.1-dermaseptin-b2 induces apoptosis by regulating the expression of pca3, malat1 and gas5 genes. the results of this study support the use of dermaseptin-b2 as a proposed therapeutic factor to reduce the progression of prostate cancer.keywords: prostate cancer, dermaseptin-b2, gas5, malat1, pca3.