بررسی اثرات ژن کد کننده buforin ii بر بیان lncrnaهای ancr، gas5 و uca1 در سلول‌هایmcf-7

سابقه و هدف: سرطان پستان بیش از یک میلیون مورد از ده میلیون نئوپلازی را که سالیانه در سراسر دنیا تشخیص داده می‌شود به خود اختصاص می‌دهد. این سرطان شایع‌ترین سرطان بین زنان و دومین علت مرگ در زنان است. تنظیم میزان بیان lncrna نقش مهمی در آپوپتوز و کنترل سرطان پستان دارد. rnaهای بلند غیر کدکننده ancr، gas5 و uca1 در القای آپوپتوز نقش دارند. بوفورین ii یک پپتید 21 اسید آمینه‌ای است. مطالعه حاضر اثرات تیمار با pcdna3.1-buforin ii بر تغییرات سطح بیان ژن‌های ancr، gas5 و uca1 در سلول‌های mcf-7 ترانسفکت شده با وکتور نوترکیب و وکتور فاقد ژن هدف را توصیف می‌کند.مواد و روش‌ها: توالی ژن کد کننده buforin ii از سایت ncbi گرفته شد و با کمک سایت‌های addgene و snapgene در وکتور بیانی pcdna3.1(+) کلون شد. باکتری اشریشیا کلی سویه top10f توسط پلاسمید نوترکیب pcdna3.1(+)-buforin ii ترانسفورم شد. پس از تکثیر پلاسمید نوترکیب در باکتری، خالص سازی آن انجام گرفت. رده سلول‌های سرطانی mcf-7 به کمک لیپوفکتامین 2000 توسط وکتور نوترکیب و وکتور فاقد ژن هدف ترانسفکت شدند. از سلول‌های ترانسفکت شده استخراج rna صورت گرفت و cdna سنتز شد. سطح بیان ژن‌های ancr، gas5 و uca1 با روش real-time pcr و محاسبه ctδδ تعیین شد. در مطالعه حاضر مقدار p کوچکتر از 05/0 به لحاظ آماری معنی‌دار در نظر گرفته شد. یافته‌ها: نتایج حاصل از مطالعه حاضر نشان داد که تیمار با pcdna3.1-buforin ii پس از انکوباسیون 24 ساعته در دمای °c 37، سطح بیان ژن ancr که در مهار تکثیر چرخه سلولی دخیل است را به طور معنی‌داری کاهش داده (p˂0.01) شد. از طرفی تیمار با pcdna3.1-buforin ii باعث افزایش معنی‌دار بیان ژن‌های gas5 (p˂0.001) و uca1 که در القای آپوپتوز نقش دارند، گردید (p˂0.0001). تیمار رده سلولی mcf-7 با وکتور فاقد ژن هدف هیچ گونه تغییر معنی‌داری را نسبت به گروه شاهد نشان نداد.نتیجه‌گیری: پژوهش حاضر تایید می‌کند که pcdna3.1-buforin ii با تنظیم بیان ژن‌های ancr، gas5 و uca1 می‌تواند باعث القای آپوپتوز شود. نتایج این مطالعه به استفاده از بوفورین ii به عنوان یک فاکتور درمانی جدید و موثر برای کنترل احتمالی پیشرفت سرطان پستان کمک می‌کند.

study the effects of buforin ii coding gene on the expression of ancr, gas5 and uca1 lncrnas in mcf-7 cells

background: breast cancer accounts for more than one million cases out of ten million neoplasias diagnosed annually worldwide. this cancer is the most common cancer among women and the second leading cause of death in women. regulation of lncrna expression plays an important role in apoptosis and control of breast cancer. long non-coding rnas ancr, gas5 and uca1 are involved in the induction of apoptosis. buforin ii is a 21 amino acid peptide. the present study describes the effects of treatment with pcdna3.1-buforin ii on the expression level changes of ancr, gas5 and uca1 genes in mcf-7 cells transfected with recombinant vector and free vector.materials and methods: the sequence of the buforin ii coding gene was obtained from the ncbi site and cloned into the expression vector pcdna3.1(+) with the help of addgene and snapgene sites. escherichia coli strain top10f was transformed by recombinant plasmid pcdna3.1(+)-buforin ii. after multiplying the recombinant plasmid in bacteria, its purification was done. mcf-7 cancer cell line was transfected with lipofectamine 2000 by recombinant vector and vector without target gene. rna was extracted from the transfected cells and cdna was synthesized. the expression level of ancr, gas5 and uca1 genes was determined by real-time pcr method and δδct calculation. in the present study, p value smaller than 0.05 was considered statistically significant.results: the results of the present study showed that treatment with pcdna3.1-buforin ii after 24 hours of incubation at 37 ℃, significantly reduced the expression level of ancr gene, which is involved in the inhibition of cell cycle proliferation (p˂0.01). on the other hand, treatment with pcdna3.1-buforin ii significantly increased the expression of gas5 (p˂0.001) and uca1 genes, which play a role in apoptosis induction (p˂0.0001). treatment of mcf-7 cell line with the vector lacking the target gene did not show any significant changes compared to the control group.conclusion: the present study confirms that pcdna3.1-buforin ii can induce apoptosis by regulating the expression of ancr, gas5 and uca1 genes. the results of this study help to use buforin ii as a new and effective therapeutic factor for the possible control of breast cancer progression.