بررسی تولید آنزیم نوترکیب taq dna polymerase در باکتری e. coli

مقدمه: تکثیر dna با استفاده از taq dna polymeraseیکی از گسترده‌ترین تکنیک‌های مورد استفاده در زمینه فناوری dna است. این آنزیم نقش بسیار مهمی در تکثیر ماده ژنتیکی موجودات زنده و ادامه حیات آن‌ها دارد. هدف از این مطالعه طراحی و تولید قطعه کد‌کننده dna پلیمراز taq و بررسی بیان آن در باکتری e. coli، است. مواد و روش‌ها: در این مطالعه تجربی، وکتور نوترکیب pet-28a-taq طراحی و سنتز شد. سپس به روش cacl2 و شوک حرارتی وارد باکتری اشریشیا کلی سویه top10fشد و تخلیص گردید. در گام بعدی، واکنش ترانسفورماسیون وکتور نوترکیب در باکتری اشریشیا کلی سویه bl21(de3) انجام شد. جهت القای بیان ژن نوترکیب taq از القاگر iptg در زمان های مختلف استفاده گردید. برای تایید بیان در سطح rna از تکنیک rt-pcr استفاده شد. یافته‌ها: ترانسفورماسیون وکتور نوترکیب در باکتری e.coli سویه top10f توسط واکنش pcr و هضم آنزیمی تایید شد. بیان موفقیت آمیز پروتئین taqدر باکتری bl21 توسط واکنش rt-pcr با رویت باند 194 جفت بازی روی ژل آگارز، تایید شد. نتیجه‌گیری: با توجه به بیان موفقیت آمیز قطعه taq در باکتری e.coli سویه bl21، می توان این قطعه را در حجم بالا تولید کرد و به صورت تجاری در اختیار مصرف کننده قرار داد.

investigating the production of recombinant taq dna polymerase enzyme in e. coli bacteria

background: dna replication using taq dna polymerase is one of the most widely used techniques in the field of dna technology. this enzyme plays a very important role in the reproduction of the genetic material of living organisms and their survival. the purpose of this study is to design and produce taq dna polymerase coding fragment and to investigate its expression in e. coli bacteria. materials and methods: in this experimental study, pet-28a-taq recombinant vector was designed and synthesized. then, by cacl2 method and heat shock, it entered escherichia coli strain top10f and was purified. in the next step, the transformation reaction of the recombinant vector was performed in escherichia coli strain bl21(de3). to induce the expression of taq recombinant gene, iptg inducer was used at different times. rt-pcr technique was used to confirm the expression at the rna level. results: the transformation of the recombinant vector in e.coli strain top10f was confirmed by pcr reaction and enzymatic digestion. the successful expression of taq protein in bl21 bacteria was confirmed by rt-pcr reaction with the visualization of 194 bp band on agarose gel. conclusion: considering the successful expression of taq fragment in e.coli strain bl21, this fragment can be produced in high volume and commercially available to consumers.