ارزیابی تغییرات بیان کمی ژن muc2 تحت تاثیر مکمل سازی جیره با سطوح مختلف آلفاتوکوفول استات، تیموکوئینون وسیزامین در بلدرچین های ژاپنی گوشتی و تخم گذار

مقدمه و هدف: به منظور ارزیابی تغییرات بیان کمی ژن muc2 تحت تاثیر مکمل سازی جیره با آلفاتوکوفول استات، سیزامین و تیموکوئینون در بلدرچین های ژاپنی گوشتی و تخم گذار از 6 تیمار آزمایشی شامل گروه شاهد (بدون مکمل سازی) و گروه‌های مصرف‌کننده جیره‌های مکمل شده با سطوح 100 و200 میلی‌گرم در هر کیلوگرم خوراک از ترکیبات آلفاتوکوفول استات، تیموکوئینون و سیزامین استفاده شد.روش کار: نمونه های منجمد شده در نیتروژن مایع که در سنین 35 روزگی و 85 روزگی نمونه‌هایی از ژوژنوم دو قطعه بلدرچین ذبح شده جمع‌آوری شده بودند به منظور بررسی بیان کمی ژن muc2 با استفاده از کیت استخراج rna ساخته شده توسط شرکت فرمنتاز مورد استفاده قرار گرفتند. ارزیابی کیفیت و کمیت rna با استفاده از اسپکتروفوتومتر نانودراپ ترمو انجام شد. سپس ساخت cdna با استفاده از کیت ساخت شرکت فرمنتاز و ارزیابی، رقیق‌سازی و همسان‌سازی آن به صورت300 نانوگرم بر میکرولیتر صورت‌گرفت. در ادامه mrna موجود با استفاده از rt-pcr و با استفاده از کیت سایبرگرین اندازه‌گیری شد. برای انجام آنالیز بیان ژن، پس از مراحل استخراج rna و حذف باقی‌مانده‌های dna ژنومی، اقدام به ساخت cdna به‌عنوان الگوی اولیه برای واکنش‌های rt-pcr شد. تعیین کمیت نسبی در rt-pcr به‌وسیله افزایش تشعشع نور فلورسنت در نتیجه اتصال رنگ سایبرگرین صورت پذیرفت و مقادیر مربوط به چرخه آستانه (ct) حاصل از تکرارهای زیستی و تکنیکی هر تیمار برای محاسبه میزان بیان کمی ژن muc2 در بافت روده بلدرچین‌های مورد مطالعه ثبت گردید. میانگین ct، برای تکرارهای تکنیکی ژن muc2 و β-actin محاسبه شد ونهایتاً میزانct∆ توسط کسر (ct) هدف و (ct) مرجع برآورد و بیان کمی ژن muc2 محاسبه گردید.یافته ها: نتایج این مطالعه نشان دهنده افزایش معنی‌دار بیان کمی mrna ژن muc2 تحت تاثیر مصرف سطوح 100 و 200 میلی‌گرم آلفاتوکوفول استات، تیموکوئینون و سیزامین در بلدرچین های ژاپنی گوشتی و تخم گذار بود (05/0≥p). نتایج بررسی مقایسه میانگین ها بین اعمال مکمل‌سازی سطوح 100 و 200 میلی‌گرم آلفاتوکوفول استات، تیموکوئینون و سیزامین نشان‌دهنده وجود اختلافات معنی‌دار آماری در بین گروه‌های مصرف‌کننده سطوح یکسان از آلفاتوکوفول استات، تیموکوئینون و سیزامین در بلدرچین های ژاپنی گوشتی و تخم گذار تحت آزمایش بود (05/0≥p).نتیجه گیری: به طور کلی نتایج این مطالعه نشان دهنده افزایش بیان کمی ژن muc2 تحت تاثیر مصرف جیره‌های مکمل‌شده با سطوح مختلف آلفا توکوفرول استات، سیزامین و تیموکوئینون بود و احتمالا مکمل سازی جیره با ترکیبات فوق به وسیله تحریک انتخابی رشد و بهبود فعالیت باکتری های مفید دستگاه گوارش با حفاظت از پرزهای روده و افزایش تراکم سلول‌های جامی منجر به ایجاد تغییرات دینامیکی در ترشح موسین و ویسکوزیته موکوس و بیان کمی ژن muc2 در بلدرچین های گوشتی و تخم گذار مورد آزمایش شد.

evaluation of the quantitative expression changes of muc2 gene under the influence of diet supplementation with different levels of alpha tocopherol acetate, thymoquinone and sesamin in broiler and laying japanese quails

background: the aim of current study was to investigate the effect of dietary alpha tocopherol acetate, sesamin and thymoquinone supplemented diets on of muc2 gene expression in broiler and laying japanese quails. materials and methods: experimental treatments whereas a control group and alpha tocopherol acetate, thymoquinone, and sesamin supplemented diets at levels of 100 and 200 mg/ kg. evaluation of rna quality and quantity was done using thermo nanodrop spectrophotometer. then cdna production was done using the kit made by fermentase company and its evaluation, dilution and homogenization was done in the form of 300 ng per microliter. then the available mrna was measured using rt-pcr and using the cyber green kit. to perform gene expression analysis, after rna extraction and removal of genomic dna residues, cdna was made as the initial template for rt-pcr reactions. determination of the relative quantity in rt-pcr was done by increasing the fluorescent light radiation as a result of the binding of cyber green dye and the values related to the threshold cycle (ct) obtained from the biological and technical repetitions of each treatment to calculate the quantitative expression of the muc2 gene in the intestinal tissue of the broiler and layer experimental quails. the average ct was calculated for the technical repetitions of muc2 and β-actin gene, and finally, the amount of ct∆ was estimated by the fraction (ct) of the target and (ct) of the reference and the quantitative expression of the muc2 gene was calculated.results: the results showed that under the influence of 100 and 200 mg/ kg of alpha tocopherol acetate, thymoquinone and sesamin, the muc2 mrna gene expression was increased in broiler and layer japanese quals. conclusion: overall, the results of the study showed that the beneficial effects of alpha tocopherol acetate, thymoquinone and sesamin supplemented diets m-rna expression of muc2 in broiler and laying japanese quails. probably, supplementing the quail’s diet with the above compounds by selectively stimulating the growth and improving the activity of beneficial bacteria in the digestive tract by protecting the intestinal villi and increasing the density of goblet cells leads to dynamic changes in mucin secretion and mucus viscosity and better quantitative expression of the muc2 gene in broiler and laying quails.