بررسی اثر خاموش کنندگی mir-148a بربیان ژن و بروز پروتئین tim3 در رده سلولی am

در لوسمی میلوییدی حاد aml که تحت عنوان لوسمی غیر لنفوییدی نیز شناخته می شود .سلول های میلوییدی نابالغ lsc در مغز استخوان و در نهایت درخون واندام ها تجمع می یابند وبا تولید سلول های خونی نرمال تداخل ایجاد می کند. تهیه پروفایل بیانی تفکیکی برای lsc و hsc های aml منجر به کشف tim3 به عنوان یک مولکول سطحی اختصاصی سلول های lsc شد. میکروrna یک مسیر تازه کشف شده هستند که بیان ژن ها راتنظیم می کند ودرتوسعه بافت وتنظیم کنندگی خون بد خیم وطبیعی نقش دارد . میکروrna از 22 نوکلیوتید تشکیل شده اند که به ناحیه 3utr,mrna هدف متصل می شوندو بیان ژن مورد نظر را در سطح رونویسی تنطیم منفی می کند. میکرو rnaها از طریق پنج مکانیسم متفاوت در بیماری زایی aml نقش دارند.تغییرات تعداد کپی ،تغییردر نزدیک به ناحیه ژنومی انکوژنیک به دلیل جا به جایی کروموزومی ، تغییرات اپی ژنتیکی هدف گیری نا به جای نواحی پروموتر mirna توسط فاکتورهای رونویسی با انکوپروتیین های تغییر یافته ودر نهایت پردازش mirnaهای نامنظم . با توجه به توضیحات فوق ومطالعات پیوسته ای که بر روی عملکرد درمانی mirna داشتیم وبا استناد به پژوهش های پیشین مبتنی بر افزایش بیان tim3 در سلول های سرطانی aml بر آن شدیم تا با به کار گیری آزمایش های علمی و دقیق تاثیر mirna-148a را بر بیان پروتیین tim3در سرطان amlمشاهده کنیم . با استفاده از پایگاه mirbase متوجه شدیم mirna148a می تواند روی tim3 تاثیر داشته باشد.در این مطالعه نقش mir-148aدر خاموش کنندگی tim3 اندازه گیری شد. سلول های hl-60 کشت داده شده وبعد از تحریک با pma بیان tim3با دستگاه فلوسایتومتری اندازه گیری شد. میزان بیان tim3 بعد از ترانسفکشن با mir-148a به روش ریل تایم pcr نیز بررسی شده ومیزان خاموش کنندگی این میکروrna روی ژن tim3 مشخص شد .نتایج ما نشان دا د که mirna-148a برکاهش میزان بیان وپروتئین tim3 تاثیر به سزایی دارد.

investigating the effect of silencing mir-148a on expression of tim3 in am cell line

acute myeloid leukemia is a heterogenic malignant disease in which differentiation of cells is impaired and immature leukemic cells accumulate in blood circulation, bone marrow and other organs. in aml, stem cells consist of hematopoietic and leukemic ones. treatments of cancers such as chemotherapy just targets leukemic cells but does not affect on lscs and lscs continue to grow and produce leukemic cells and the disease relapses. there are some markers on the surface of lscs that could be subjects for targeting such as tim3. tim3 just expresses on lscs and could be silenced by using mirnas. they are small non coding rnas that can regulate gene expression by inhibiting translation or mrna cleavage. there are some bioinformatics programs that predict targets of mirnas. some of them indicate that mir-148a can target tim3. in this study the role of mir-148a in silencing of tim3 was evaluated experimentally.hl-60 cell line was cultured and induced by pma to express tim3. on the next day expression of tim3 was measured by flow cytometry. then pma threated cells were cultured in 24 well plate in four groups and transfected by mir-148a mimic, scramble fitc , transfection reagent and cell culture medium as negative control respectively. after a day scramble fitc group was observed by fluorescent microscope and the next day the expression of tim3 was evaluated by flow cytometery in all groups. finally the mrna of tim3 was quantified by qpcr.our results showed that mir-148a can reduce tim3 in protein and mrna s quantity significantly. therefore bioinformatics prediction data were confirmed by experiment. targeting of tim3 could be considered as a therapeutic methods in some cancers and auto immune diseases by using mirna or lock nucleic acids (lna).