بررسی ایمنی‌زایی واکسن ژنی کدکننده ureb بروسلا آبورتوس در موش‌های balb/c

سابقه و هدف: بروسلوز به عنوان شایع‌ترین بیماری مشترک بین انسان و دام در تمام نقاط جهان وجود دارد. مناطق بسیاری از جمله خاورمیانه، آفریقا، آمریکای لاتین، آسیای مرکزی و حوزه مدیترانه هنوز با بروسلوز درگیر هستند. واکسیناسیون موثرترین و اقتصادی‌ترین روش پیشگیری از بیماری‌های عفونی مانند بروسلوز است. در پژوهش حاضر، ایمنی‌زایی واکسن ژنی کدکننده ureb بروسلا آبورتوس در موش‌های balb/c ارزیابی شد.مواد و روش‌ها: وکتور نوترکیب pcdna3.1 به همراه ژن ureb طراحی و سنتز گردید. صحت سنتز پلاسمید نوترکیب توسط هضم آنزیمی و توالی‌یابی سنجیده شد. پلاسمید نوترکیب در باکتری اشریشیا کلی تکثیر و سپس خالص‌سازی شد. واکسیناسیون موش با pcdna3.1 حاوی ureb (pcdna3.1-ureb) و pcdna3.1 فاقد ژن هدف انجام شد. تست real-time pcr برای تجزیه و تحلیل پاسخ ایمنی سلولی 14 و 28 روز پس از آخرین تجویز واکسن به منظور سنجش بیان سایتوکاین‌های il-4، il-10، tnf-a وifn-γ در طحال استفاده شد. در نهایت، پتانسیل محافظتی واکسن pcdna3.1-ureb در موش‌های balb/c با قرار دادن آن‌ها در معرض چالش با بروسلا آبورتوس ارزیابی شد.یافته‌ها: هضم آنزیمی پلاسمید تولید شده با استفاده از ecori و xbai انجام شد. قطعات حاصل از هضم آنزیمی دوگانه بر روی ژل بررسی شد. تشکیل باند 324 جفت بازی معرف ژن ureb، تولید موفق پلاسمید نوترکیب را تایید کرد. بیان ifn-γ و tnf-a در موش‌هایی که واکسن pcdna3.1-ureb را دریافت کرده بودند، در روز 14 از سطح معنی‌داری بالاتری نسبت به il-10 و il-4 برخوردار بود.نتیجه‌گیری: مطالعه حاضر یک واکسن ژنی جدید را بر علیه بروسلا آبورتوس که عامل ایجاد تب مالت است، ارائه می‌کند. این روش می‌تواند به عنوان یک رویکرد جدید، امیدوارکننده، ایمن، پایدار و ساده برای جایگزینی با واکسن‌های زنده ضعیف شده که اکنون در دسترس‌اند، باشد.

evaluation of immunogenicity of dna vaccine coding ureb gene of brucella abortus in balb/c mice

background: brucellosis is the most common disease between humans and animals in all parts of the world. many regions, including the middle east, africa, latin america, central asia, and the mediterranean, are still affected by brucellosis. vaccination is the most effective and economical way to prevent infectious diseases like brucellosis. in the present study, the brucella abortus ureb coding gene vaccine immunogenicity was evaluated in balb/c mice.materials and methods: pcdna3.1 recombinant vector was designed and synthesized along with the ureb gene. the accuracy of recombinant plasmid synthesis was measured by enzymatic digestion and sequencing. the recombinant plasmid was propagated in escherichia coli bacteria and then purified. mice were vaccinated with pcdna3.1 containing ureb (pcdna3.1-ureb) and pcdna3.1 lacking the target gene. a real-time pcr test was used to analyze the cellular immune response 14 and 28 days after the last vaccine administration to measure the expression of il-4, il-10, tnf-α and ifn-γ cytokines in the spleen. finally, the protective potential of the pcdna3.1-ureb vaccine was evaluated in balb/c mice by challenging them with brucella abortus.results: enzymatic digestion of the generated plasmid was performed using ecori and xbai. the fragments obtained from double enzymatic digestion were analyzed on the gel. the formation of a band of 324 bp representative of the ureb gene confirmed the successful production of the recombinant plasmid. the expression of ifn-γ and tnf-α in mice that received the pcdna3.1-ureb vaccine had a significantly higher level than il-10 and il-4 on day 14.conclusion: the present study presents a new gene vaccine against brucella abortus, the causative agent of malt fever. this method could be a new, promising, safe, stable, and specific approach to replacing the live attenuated vaccines that are available now.