بررسی میزان بیان lncrnaهای gas5، neat1 و sra در سلول‌های mcf-7 ترانسفکت شده با وکتور نوترکیب pcdna3.1(+)-alpha toxin

مقدمه و هدف: سرطان در نتیجه تقسیم غیرقابل کنترل سلول‌ها و در اثر عوامل محیطی و اختلال‌های ژنتیکی به وجود می‌آید. تومور مجموعه‌ای از سلول‌هاست که به دلیل رشد و تقسیم خارج از کنترل آن‌ها ایجاد می‌شود. مطالعات اخیر نشان می‌دهد که چندین جایگاه خطر موثر در ایجاد سرطان، به lncrnaها رونویسی می‌شوند و رونوشت‌های حاصل، نقش‌های کلیدی در فرایند تومورزایی ایفا می‌کنند. هدف از انجام این پژوهش بررسی تغییر بیان lncrnaهای sra، neat1 و gas5 بعد از تیمار سلول سرطان سینه با سم آلفاتوکسین باکتری استافیلوکوکوس اورئوس می‌باشد.مواد و روش‌ها: پلاسمید نوترکیب pcdna.3(+) حاوی ژن آلفاتوکسین به روش شوک حرارتی وارد باکتری e.coli سویه top10 شد و سپس تخلیص شد. وکتور نوترکیب حاوی ژن آلفاتوسین به روش لیپوفکشن وارد سلولهای mcf-7 شد و غربالگری توسط آنتی بیوتیک نئومایسین انجام گرفت. استخراج rna و سنتز cdna از سلول های ترانسفکت شده انجام شد. در نهایت real time rt-pcr به منظور بررسی تغییر بیان lncrnaهایsra, neat1 وgas5 انجام شد. نتایج: پس از لیپوفکشن سلول‌ها در محیط کشت حاوی آنتی بیوتیک نئومایسین رشد کردند. سپس استخراج rna و سنتز cdna انجام شد. واکنش real time rt-pcr نشان داد که بیان ژن آلفاتوکسین در سلول‌های سرطان سینه رده mcf-7 سبب کاهش بیان incrnaهای neat1 و sra نسبت به گروه شاهد و همچنین افزایش بیان gas5 شد.نتیجه‌گیری: با توجه به این که incrna gas5 باعث افزایش معنی‌دار بیان و incrnaهای neat1 و sra کاهش بیان را نشان داده‌اند در نتیجه موجب اثرات ضد سرطانی می‌گردند و سلول را می‌توانند به سمت آپوپتوز هدایت کنند.

study of the expression of gas5, neat1 and sra lncrnas in mcf-7 cells transfected with pcdna3.1(+)-alpha toxin recombinant vector

background: cancer is the result of uncontrolled cell division and is caused by environmental factors and genetic disorders. a tumor is a collection of cells that are caused by their growth and division beyond their control. cell death is a mechanism or set of genetically engineered events in which the cell is forced into suicide. the aim of this study was to investigate the change of expression of sra, neat1 and gas5 lncrnas after treatment of breast cancer cells with alpha toxin.materials and methods: the recombinant plasmid containing alpha toxin gene was introduced into the e. coli strain of top10 by thermal shock method and then purified. the recombinant vector was introduced into the mcf-7 cells by lipofection method and screening was done by neomycin antibiotic. extracting rna and synthesizing cdna from transfected cells. finally, real time rt-pcr was performed to investigate the change of expression of sra, neat1 and gas5 lncrna expressions.results: the expression of alpha toxin gene in mcf-7 breast cancer cells reduced the expression of sra, neat1 and gas5 lncrna expressions compared to the control group.conclusion: the results indicate that the alpha toxin toxin gene causes anticancer effects and leads the cell to apoptosis.