بررسی میزان lncrna های ghet1 و ccat1 در سلول ترانسفکت شده با وکتور نوترکیب pcdna3.1(+)-alpha-toxin

زمینه و هدف: معده به عنوان بخشی از اندام گوارشی در هنگام سرطانی شدن از عامل‌های مهم مرگ و میر می‌باشد. سم آلفاتوکسین توسط باکتری استافیلوکوکوس اورئوس تولید می‌شود. rnaهای غیرکدکننده بلند، بخش وسیعی از بخش‌های غیرکد کننده پروتئین ژنوم انسان را در بر می‌گیرند که در هموستازی، اتصال و شکل‌دهی به ساختار ژنوم اثر می‌گذارند. دو نوع lncrna، ghet1 و ccat1 در اثر القای آپوپتوز کاهش می‌یابند. هدف بررسی اثرات ژن آلفاتوکسین باکتری استافیلوکوکوس اورئوس بر بیان lncrnaهای ghet1 و ccat1 در سلول های رده ags ترانسفکت شده با وکتور نوترکیب pcdna3.1(+)-alpha-toxin به روشtime rt-pcr realمی باشد.مواد و روش: در این مطالعه ابتدا با ساخت وکتور نوترکیب حاوی ژن آلفاتوکسین و ترانسفورماسیون آن در سلول مستعد باکتری e.coli و تخلیص‌سازی آن از این باکتری آغاز شد. در ادامه برای ترانسفکت سلول های ags با وکتور نوترکیب، از روش لیپوفکشن بهره گرفته شد. استخراج rna و سنتز cdna از سلول های ترانسفکت شده انجام شد. در نهایت real time rt-pcr به‌منظور بررسی تغییر بیان lncrnaهایghet1 و ccat1 انجام شد.نتایج: سلول‌های حاوی وکتور نوترکیب در محیط کشت حاوی آنتی بیوتیک نئومایسین رشد می‌کنند. که بر اساس داده‌های real time rt-pcr بیان lncrna های ccat1 و ghet1 به طور معنی داری در سلول سرطانی کاهش یافته است. نتیجه گیری : نتایج نشان داد، ژن سم alpha-toxin موجب اثرات ضد سرطانی می گردد و با کاهش بیان lncrna های ذکر شده، می‌تواند سلول را به سمت آپوپتوز هدایت کند.

investigating the amount of lncrnas ghet1 and ccat1 in cells transfected with the recombinant vector pcdna3.1(+)-alpha-toxin

background and purpose: the stomach, as a part of the digestive organ, is one of the important factors of mortality when it becomes cancerous. alpha-toxin is produced by staphylococcus aureus bacteria. long non-coding rnas comprise a large part of the non-protein-coding parts of the human genome which affect homeostasis and connection and shaping of the genome structure. two types of lncrnas, ghet1 and ccat1, are decreased due to induction of apoptosis. the aim of the effects of the staphylococcus aureus alpha-toxin gene on the expression of ghet1 and ccat1 lncrnas in ags cells transformed with the new pcdna3.1(+)-alpha-toxin vector by real time rt-pcr method.materials and methods: this study, starts with the construction of the recombinant vector containing female alpha-toxin and its transformation in the susceptible cell of e.coli bacteria and its purification from this bacterium. in the continuation of this article, to transfect ags cells with the recombinant vector, the lipofection method was used. rna extraction and cdna synthesis were performed from transfected cells. finally, real time rt-pcr was performed to investigate the expression changes of ghet1 and ccat1 lncrnas.results: the cells containing the recombinant vector grow in the culture medium containing the antibiotic neomycin. according to real time rt-pcr data, the expression of lncrnas ccat1 and ghet1 has decreased significantly compared to cancer cells.conclusion: the results show that the alpha-toxin gene causes anti-cancer effects and by reducing the expression of the mentioned lncrnas, it can lead the cell toward apoptosis.