شناسایی مجدد جهش مطلوب مرتبط با صفت چند قلوزایی در ژن گیرنده استروژن ii با طراحی آغازگرهای جدید و روش توالی یابی در گوسفند رومانوف

در سالهای اخیر، گوسفند نژاد رومانوف به دلیل خصوصیات ممتاز تولید مثلی مورد استقبال گسترده دامداران کشور قرار گرفته است، با اینحال، آنچه مسلم است همه قوچهای این نژاد حامل اللهای مطلوب مزتبط با چند قلوزایی نیستند. تاکنون، تلاشهای تیمهای تحقیقاتی برای شناسایی مکانیزم مولکولی کنترل کننده بی نتیجه بوده است. اخیراً، با استفاده از تکنیک مطالعه پویش کل ژنوم، یک پلی مورفیسم جدید معنی دار(مرتبط با دوقلوزای در در کروموزوم شماره 7 گوسفند رومانوف (rs423810437 ) واقع در ناحیه بالادست پروموتور ژن گیرنده هورمون استروژن تیپ 2 گزارش شد ( الل c با افزایش دوقلوزایی مرتبط است). با این انگیزه تحقیقاتی، هدف پژوهش حاضر شناسایی مجدد جهش مطلوب مرتبط با صفت چند قلوزایی در ژن گیرنده استروژن ii با طراحی آغازگرهای جدید و روش توالی یابی آن در گوسفند رومانوف می باشد. بدینمنظور، در مجموع تعداد 70 میش رومانوف با سابقه تولید مثلی انتخاب و استخراج dna، واکنش زنجیره پلی مراز پس از مرحله طراحی آغازگرهای جدید و الکتروفوز و رنگ آمیزی مطابق دستورالعمل های روتین انچام پذیرفت و سپس، محصولات حاصل از تکثیر انفرادی( 60 نمونه) برای توالی یابی سانجر به کشور چین ارسال شد. پس از بررسی کیفیت، نتایج خام توالی یابی ، با استفاده از آنالیز بیوانفورماتیکی و عملیات همردیفی نوکلئوتیدی، حضور جهشt/c) ) مجدد تایید کرد و آزمون ارتباط سنجی آماری نشان داد که میشهای حاوی کلاس اللیc در مقایسه با t، به طور معنی دار چند قلوزایی بیشتری را داشتند( p<0.01). با وجود اینکه این گزارش اولین بار در رومانوف می باشد اما، با توجه به اهمیت موضوع بررسی های مجدد نتایج این مطالعه در جمعیتهای دیگر رومانوف و تعداد نمونه بیشتر توصیه می گردد.

Double confirmation for the presence of the favorable mutation associated with the litter size in the Estrogen Receptor gene using novel primers design and sequencing methods in Romanov sheep

In recent years, Romanov sheep have been widely welcomed breed by breeders in the country due to their excellent reproductive qualities. However, is that not all bucks in this breed exhibit desirable traits associated with litter size. So far, efforts by research teams to identify the controlling molecular mechanism have been unsuccessful. Recently, using the GWAS technique, a significant new polymorphism (associated with litter size) on chr. 7 of Romanov sheep (rs423810437) was reported, localizing in the upstream region of the promoter of the estrogen hormone receptor Gene 2 (C allele with pregnant twins). With this research motivation, the goal of the current research is to re-identify the desired mutation associated with multiple tripling of estrogen receptor II gene by developing new primers and their sequencing method in Romanov sheep. For this purpose, a total of 70 Romanov sheep were collected with the reproductive history of selection and DNA extraction, polymerase chain reaction after the new primer design phase, and electrophoresis and staining according to routine laboratory instructions, and then obtained the PCR amplicons that individually replicated (60 samples) were sent to BGI company, china for Sanger sequencing. After checking the quality, the raw sequencing results using bioinformatics analysis and nucleotide alignment operations again confirmed the presence of the T/C mutation, and the statistical correlation test showed that mice containing the C allele class compared to T mice had significantly more multiple births (P<0.01). Although this report is for the first time in Romanov, due to the importance of the issue, a re-examination of the results of this study in other Romanov populations and more samples is recommended