بررسی دو روش کروماتوگرافی تلفیقی و کروماتوگرافی افینیتی برای خالص‌سازی آلفا توکسین باکتری کلستریدیوم پرفرژنس تیپ a

آلفا توکسین یا فسفولیپاز c  (plc ) توسط باکتری کلستردیوم پرفژنس تولید می‌گردد و خواص کشنده درمونوکرتیک را دارا می‌باشد. تمامی سویه‌های کلستردیوم قادر به تولید این توکسین می‌باشند که در توسعه میونکروز کلستریدی نقش بسزایی را ایفا می‌کنند. آلفا توکسین باعث بروز علائم در انسان و دام می‌گردد و تاثیرات کشنده بر سیستم روده‌ای را نشان می‌دهد. در این تحقیق سعی بر آن خواهیم داشت که روش‌های متفاوت خالص‌سازی و استخراج آلفا توکسین کلستردیوم پرفژنس تیپ a را با هم مقایسه نماییم. روش اول شامل خالص‌سازی آلفا توکسین با استفاده از تکنیک‌های ترکیبی کروماتوگرافی شامل رسوب‌دهی سولفات آمونیوم، کروماتوگرافی تبادل یون با استفاده از deae- sephadex در مقادیر 7 و 9 ph  و کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون با استفاده از sephadex g-100 بود، روش دوم مبتنی بر استفاده از کروماتوگرافی افینیتی اجرا گردید. درجه خلوص توکسین آلفا در هر مرحله از فرآیند خالص‌سازی با استفاده از sds-page ارزیابی گردید .با بررسی نتایج حاصل از دو روش فوق نتایج زیر حاصل گردید. بازدهی روش اول 88 درصد و بازده روش دوم 91.7درصد بود. مقادیر فعالیت ویژه برای روش اول و دوم به‌ترتیب   u/mg 69170 و u/mg 105.71 محاسبه گردید. نتایج  نشان داد که از روش کروماتوگرافی افینیتی می‌توان برای خالص‌سازی آلفا توکسین تولیدشده از کلستریدیوم پرفرنژنس تیپ a با خلوص بالا و نسبت فعالیت به مقدار پروتئین (hu/mg) 108700 استفاده گردد.

comparative analysis between compound chromatography and affinity chromatography for the purification of alpha toxin c.perfringense type a

alpha toxin, sometimes referred to as phospholipase c (plc), is a significant toxin generated by c. perfringens that possesses both deadly and dermonecrotic properties. all strains (a, b, c, d, e) of c. perfringens generate varying quantities of this toxin, which is recognized as a key various  factor in the development of clostridial myonecrosis.alpha-toxin is known to significantly influence several human and animal disorders, exhibiting deleterious impacts, specifically on the intestinal system. the primary objective of this research was to conduct a comparative analysis of two distinct purification techniques in order to extract alpha-toxin from c. perfringens type a. the first approach involved the alpha-toxin purification through a series of techniques, including ammonium sulfate precipitation, ion-exchange chromatography using deae sephadex at ph values of 7 and 9, and gel filtration chromatography using sephadex g-100, while the second approach was implemented using the affinity chromatography. the degree of purity of alpha-toxin was assessed at each stage of the purification process by the utilization of sds-page.the protein content and hemolysis activity were also quantified at each purification step. based on the obtained findings, examining these two approaches revealed that the first method yielded a percentage of 88, while the second method yielded percentage of 91.7. the specific activity values obtained from the calculations for the first and second methods were 69170 u/mg and 105.71 u/mg, respectively. our research shows that affinity chromatography can produce a highly pure alpha toxin with a specific activity of 108700 (hu/mg), produced by clostridium perfringens type a.