بهینه سازی روش خالص سازی پروتئین موتانت استرپتوکیناز با استفاده از تکنیک افینیتی کروماتوگرافی

تخلیص پروتئین ها همواره یکی از مهمترین دشوارترین مراحل تولید پروتئین های دارویی بوده است استرپتوکیناز به عنوان رایج ترین و در حال حاضر مقرون به صرفه ترین داروی فیبروینولیتیک از این قانون مستثنی نیست در این تحقیق ابتدا کلون تولید کننده استرپتوکیناز موتاسیون یافته (sk263cys) که تگ هیستیدینی به آن افزوده شده در محیط کشت ty2x رشد داده شده و پس از القای بیان پروتئین ، میزان تولید پروتئین توسط sds-page بررسی گردید تخلیص پروتئین با سه راهکار متفاوت انجام شد، در راهکار اول از تکنیک کروماتوگرافی افینیتی یون فلزی (imac) استفاده شد در راهکار دوم ابتدا با استفاده از رسوب دهی با آمونیوم سولفات پیش پالایش انجام شده و سپس با تکنیک افینیتی کروماتوگرافی خالص سازی ادامه یافت در راهکار سوم برای تخلیص پروتئین استرپتوکیناز از روش کروماتوگرافی آبگریز استفاده شد در تخلیص به روش افینیتی درجه خلوص 93/2 درصد و با استفاده از ستون تخلیص آبگریز استفاده شد در تخلیص به روش افینیتی درجه خلوص 93/2 درصد و با استفاده از ستون تخلیص آبگریز درجه خلوص حدود 90/4 به دست آمد در حالیکه با روش ترکیبی پیش پایش با سولفات آمونیوم و تخلیص به روش افینیتی بیشتر از 88 درصد به دست نیامد به طور کلی نتایج حاصل از این تحقیق نشان می دهد که روش imac بعنوان روش نهایی در روند تخلیص استرپتوکیناز در مقایسه با دو راهکار دیگر مناسبتر است