|
|
|
|
زیرهمسانه‌سازی و بررسی بیان ژن صناعی ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ a (bd/a)
|
|
|
|
|
|
|
|
نویسنده
|
زواری مجید ,ابراهیمی فیروز ,نظریان شهرام ,حاجی زاده عباس ,تاروردی‌زاده یوسف
|
|
منبع
|
مجله دانشگاه علوم پزشكي قم - 1395 - دوره : 10 - شماره : 6 - صفحه:13 -23
|
|
چکیده
|
زمینه و هدف: سندرم بوتولیسم توسط نوروتوکسین باکتری کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می‌شود. این نوروتوکسین دارای 7 سروتیپ از a-g می‌باشد. بهترین روش برای پیشگیری از سندرم حاصل از نوروتوکسین بوتولینوم (bont)، استفاده از واکسن‌های نوترکیب ساخته‌شده از ناحیه اتصالی آن (به‌علت داشتن اپی‌توپ‌های کافی برای تحریک سیستم ایمنی) می‌باشد. در این مطالعه ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ a (bont/a) بررسی گردیدروش بررسی: در ابتدا ژن ناحیه bont/a از genbank با شماره دسترسی cp000727.1 تهیه و براساس ترجیح کدونی e. coli، بهینه‌سازی کدون انجام شد. سپس در پلاسمید pet28a، سنتز و بعد از آن در پلاسمید بیانی pgex-4t-1، زیرهمسانه‌سازی شد. زیرهمسانه‌سازی با استفاده از روش pcr با آنزیم pfu dna polymerase و سپس برش دوگانه با آنزیم‌های xmai و xhoi انجام گرفت. از سویه e. coli bl21 به‌عنوان میزبان برای بیان استفاده شد. مارکر انتخابی برای pgex-4t-1، آمپی‌سیلین بود.یافته‌ها: روش‌های pcr و برش محدودکننده با آنزیم‌های ذکرشده، زیرهمسانه‌سازی را تایید کردند. بررسی بیان با استفاده از روش‌های sds-page و وسترن بلاتینگ (با استفاده از آنتی‌بادی اسبی ضدbont/a)، سپس کروماتوگرافی تمایلی گلوتاتیون انجام گرفت. با اینکه زیرهمسانه‌سازی با موفقیت انجام شد، ولی با به‌کارگرفتن روش‌های ذکرشده، هیچ‌گونه بیان پروتئین مشاهده نشد.نتیجه‌گیری: براساس نتایج این مطالعه، به‌نظر می‌رسد باید میزبان‌های دیگری مانند میزبان‌های یوکاریوتی برای بیان نوترکیب ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ a مورد استفاده قرار گیرند.
|
|
کلیدواژه
|
clostridium botulinum type a ,binding domain ,subcloning ,gene expression ,vaccines ,synthetic. ,کلستریدیوم بوتولینوم تیپ a ,ناحیه اتصالی ,زیرهمسانه‌سازی ,بیان ژن ,واکسن نوترکیب
|
|
آدرس
|
imam hossein university, ایران, imam hossein university, ایران, imam hossein university, ایران, imam hossein university, ایران, imam hossein university, ایران
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Authors
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|