ایمنی‌زایی آنتی‌ژنn-cftx-2 عروس دریایی در موش سوری

زمینه و هدف: عروس دریایی(chironex fleckeri) ، سمی ترین گونه و خطرناک ترین موجود دریایی است. cftx-2 یکی از پروتئین های آنتی ژنیک زهر عروس دریایی بوده که به منظور تحریک سیستم ایمنی، جهت درمان و به عنوان کاندید واکسن پیشنهاد شده است. این مطالعه با هدف طراحی، بهینه سازی، سنتز و بیان ژن n-cftx-2 در e. coli و بررسی تولید آنتی بادی و ایمنی زایی در موش سوری انجام شد.روش بررسی: در این مطالعه تجربی، توالی ژن کامل n-cftx-2 از ncbi (به شماره afq00677.1) به دست آمد. پس از بهینه سازی کدونی میزبانe. coli ، سایر بررسی های بیوانفورماتیکی لازم برای بیان بهتر ژن؛ از قبیل پایداری پروتئین و ساختار mrna انجام شد. توالی ژن جهت سنتز و همانندسازی در وکتور pet21a(+) سفارش داده شد. وکتور نوترکیب به درون باکتری e. coli bl21 منتقل و بیان پروتئین با iptg القا گردید. پس از تخلیص پروتئین، آنتی ژن حاصل در چهار نوبت به موش ها تزریق و میزان آنتی بادی تولیدی در سرم آنها اندازه گیری شد، سپس آنتی بادی تولیدی از سرم موش جداسازی و به وسیله تست elisa تایید گردید. 60 روز پس از اولین تزریق، حیوانات به وسیله زهر chironex fleckeri چالش شدند.یافته ها: توالی ژنی n-cftx-2 کلون شده در وکتور بیانی pet21a(+) به وسیله pcr و پروتئین نوترکیب تولیدشده به وسیله sds-page و لکه گذاری وسترن تایید گردید. همچنین موش های ایمن شده 50 برابر ld50، زهر عروس دریایی را تحمل کردند.نتیجه گیری: با توجه به خاصیت آنتی ژنی n-cftx-2 و تولید آنتی بادی در حیوان آزمایشگاهی، می توان از این پروتئین در مطالعات آتی به عنوان یک کاندید واکسن استفاده کرد.

immunogenicity of n-cftx-2 antigen of chironex fleckeri jellyfish in mice

background and objectives: chironex. fleckeri is the most toxic and dangerous marine species. cftx-2 is one of the antigenic proteins of jellyfish venom that has been suggested for stimulation of the immune system, for treatment, and as a candidate for vaccine. the purpose of this study was designing, optimization, synthesis, and expression of the n-cftx-2 gene in e. coli and investigation of the production of antibodies and immunization in mice. methods: in this experimental study, the complete sequence of n-cftx-2 gene was obtained from ncbi (with accession number afq00677.1). after optimizing the codon of e. coli host, other bioinformatics studies needed for better gene expression were performed, such as protein stability and mrna structure. the gene sequence was ordered for synthesis and replication in the pet21a (+) vector. the recombinant vector was transformed into e. coli bl21 and protein expression was induced by iptg. after purification of the protein, the obtained antigen was injected into the mice in four steps and the amount of antibody produced in their serum, was measured. then, the produced antibody was isolated from the serum and confirmed by elisa assay. sixty days after the first injection, the mice were challenged by the chironex fleckeri jellyfish venom. results: the n-cftx-2 gene sequence cloned in the expression vector pet21a (+) was confirmed by pcr, and the produced recombinant protein was confirmed by sds-page and western blot. moreover, the immunized mice tolerated jellyfish venom 50 x ld50. given the antigenic properties of n-cftx-2 and antibody production in laboratory animal, this protein can be used as a vaccine candidate in future studies.