بررسی ایمنی‌زایی کاندید واکسن نوترکیب ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ e بر پایه کیتوسان به روش مخاطی

زمینه و هدف: سندروم بوتولیسم توسط سروتیپ های a تا g نوروتوکسین باکتری های جنس کلستریدیوم ایجاد می شود. زیرواحد اتصالی نوروتوکسین به علت داشتن خاصیت ایمونوژنی، کاندید مناسبی جهت تهیه واکسن است. در این تحقیق ایمنی زایی کاندید واکسن نوترکیب ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ e بر پایه کیتوسان به روش مخاطی بررسی گردید.روش بررسی: در این مطالعه تجربی، نانوذرات کیتوسان حاوی پروتئین rbont/e با روش ژلاسیون یونی، تهیه و به صورت خوراکی و داخل بینی به موش تجویز شد. پس از هر تجویز، تیتر آنتی بادی igg با روش elisa سنجش شد. در نهایت، تمام گروه ها با نوروتوکسین فعال بوتولینوم تیپ e چالش شدند. داده ها با استفاده از آزمون دانکن تحلیل واریانس مکرر بررسی گردید. سطح معنی داری، p<0/05 در نظر گرفته شد.یافته ها: تیتر آنتی بادی igg پس از هر بار تجویز در همه گروه های مورد آزمون (بجز گروه های کنترل) افزایش یافت. طبق نتایج چالش با نوروتوکسین فعال بوتولینوم تیپ e، موش هایی که با نانوذرات حاوی آنتی ژن به صورت خوراکی و داخل بینی ایمن شده بودند، همچنین موش هایی که تنها آنتی ژن را به صورت خوراکی دریافت کردند، توانستند 500 برابر ld50 را تحمل کنند. گروهی که به صورت داخل بینی با آنتی ژن به تنهایی ایمن شده بود نیز 2000 برابر ld50 را تحمل کرد.نتیجه گیری: نتایج این تحقیق نشان داد استفاده از نانوذرات کیتوسان، افزایش معنی داری در میزان ایمنی زایی آنتی ژن نوترکیب نوروتوکسین بوتولینوم در روش خوراکی و داخل بینی ندارد (p>0/05)؛ حتی در روش داخل بینی، موجب افت ایمنی زایی نیز می شود.

An Investigation of Immunogenicity of Chitosan-Based Botulinum Neurotoxin E Binding Domain Recombinant Candidate Vaccine via Mucosal Route

Background and Objectives: Botulism syndrome is caused by serotypes AG of neurotoxins of Clostridium genus. Neurotoxin binding domain is an appropriate vaccine candidate due to its immunogenic activity. In this study, the immunogenicity of chitosanbased botulinum neurotoxin E binding domain recombinant candidate vaccine was investigated via mucosal route of administration.Methods: In this experimental study, chitosan nanoparticles containing rBoNT/E protein were synthesized by ionic gelation method and were administered orally and intranasally to mice. After each administration, IgG antibody titer was measured by ELISA method. Finally, all groups were challenged with active botulinum neurotoxin type E. Data were analyzed using Duncan and repeated ANOVA tests. The significance level was considered as p<0.05.Results: After each administration, IgG antibody titre was increased in all the test groups (except the control group). According to the results of challenge with active botulinum neurotoxin type E, the mice immunized orally and intranasally by nanoparticles containing the antigen and also the mice that only received the antigen orally, could tolerate 500 folds of LD50. The group immunized intranasally with only antigen tolerated 2000 folds of LD50.Conclusion: The results of this research showed that use of chitosan nanoparticles has no significant increase in the immunogenicity of recombinant botulinum neurotoxin antigen in oral and intranasal routes (p>0.05), even intranasal route reduced the immunogenicity.