عزل و توصیف بکتریا E. coli O157:H7 من اللحم و الجبن و الکشف عن جینات Stx1 و Stx2 و hlyA و eaeA باستخدام تقنیة Multiplex PCR

تم جمع 189 عینة غذائیة مختلفة اشتملت على 74 عینة لحم بقری مفروم ، 115 عینة جبن ابیض محلی من ثلاث مناطق من بغداد (الصدریة ، ابو غریب ، الفضیلیة) ، اجری المسح لجمیع العینات للتقصی عن وجود بکتریا escherichia coli من النمط المصلی o157:h7 و تمییزها عن باقی سلالات ایشیریشیا القولون غیر المخمرة للسوربتول (nsf e.coli) non-sorbitol fermenting escherichia coli زرعت العینات على وسط اغنائی سائل (enrichment broth) و حضنت بدرجة حرارة 41.5 م لمدة 6 ساعات تبعها الزرع على وسط اکار الماکونکی الحاوی على سکر السوربتول و المضاف الیه مضاد الحیویة السفکسیم و ملح التیلورایت (ct-smac) (cefixime tellurite - sorbitol macconkey agar). تم الحصول على 66 عزلة بکتیریة غیرمخمرة للسوربتول شخص منها 13 عزلة ایشیریشیا القولون ( 6 عزلات من اللحم و 7 عزلات من الجبن) وذلک باستخدام الاختبارات الکیموحیویة التقلیدیة و نظام التشخیص api20e و التی لم تعطِ نتائج کافیة تمکن من تفریق النمط المصلی o157:h7 بشکل نهائی عن باقی عزلات nsf e.coli اجریت اربع اختبارات کیموحیویة خاصة لتشخیص النمط المصلی o157 و تمییزه عن باقی انواع البکتریا غیر المخمرة الانتیروهیمولایسین) حیث اظهرت النتائج عائدیة عزلتان فقط الى المجموعة المصلیة o157 ( عزلة واحدة من عینات اللحم و عزلة واحدة من عینات الجبن) ، تم اجراء فحص التلازن بحبیبات اللاتکس المرتبطة بالاجسام المضادة للمستضدین o157 و h7 و اعطت العزلتان نتیجة ایجابیة . شخصت العزلات باستعمال تقنیة التفاعل التضاعفی المتعدد لسلسلة الدنا (mpcr ) (multiplex polymerase chain reaction) للکشف عن وجود او غیاب اربعة انواع من الجینات هی eaea ، hlya ، stx2 ، stx1 المشفرة لعوامل ضراوة رئیسیة لتشخیص بکتریا e.colio157:h7 المعزولة و ذلک باستخدام بادئات نوعیة تستهدف مواقع متخصصة للجینات الهدف المذآورة انفا و فی تفاعل واحد ، واظهرت النتائج وجود تباین فی المحتوى الجینی بین عزلات بکتریا e. coli o157:h7 فقد احتوت احدى العزلات (من اللحم) على الجینات الاربعة بینما احتوت العزلة الثانیة (من الجبن) على اثنین من الجینات فقط هی .hlya و stx1.