انتاج انزیم البروتیز من عزلات بکتیریا الزوائف الزنجاریة وتنقیتة ودراسة بعض خصائصة

نفذت هذه الدراسة لغرض عزل وتشخیص البکتریا المحللة للبروتین والمنتجة لانزیم البروتیز وتشخیصها من بعض العینات السریریة للمرضى المراجعین لمستشفیات مدینة الرمادی ، وتحدید الظروف المثلى لانتاج انزیم البروتیز وتنقیته ودراسة خصائص الانزیم والظروف المثلى لعمله. واستعمل للعزل اوساط زرعیة مثل وسط اکار الماکونکی ووسط الجکلیت اکار واکار الدم ووسط الجیلاتین الصلب فضلا عن الفحوصات المورفولوجیة والکیموحیویة ، واختبرت قابلیة العزلات على انتاج انزیم البروتیز باستعمال وسط الجیلاتین الصلب ووسط مسحوق قرون الاغنام ووسط مسحوق کوالح الذرة وتمیزت العزلات بقدرتها على انتاج انزیم البروتیز مع وجود اختلاف فی کفاءة هذه العزلات ، انتخبت العزلة المحلیة p. aeruginosa المعزولة من الحروق لانها الاکفا فی انتاج الانزیم. واختبرت کفاتها فی مقاومة المضادات الحیویة ، واظهرت العزلة مقاومة لاغلب المضادات الحیویة المستعملة فی الدراسة ، ولاسیما مضادات البیتا لاکتام والتتراسایکلینات ومجموعة الامینوکلایکوسید ، الا انها کانت حساسة لمضاد الببراسلین . وحددت الظروف المثلى لانتاج انزیم البروتیز ، اذ کان الوسط الزرعی مسحوق قرون الاغنام ، ذو الاس الهیدروجینی (7) ، والملقح بـ(10 6 x 1) خلیة / مللتر مع الحضن لمدة (24) ساعة فی (32) مْ هی افضل الظروف لانتاج الانزیم . واظهرت الخطوات المتسلسلة تنقیة انزیم البروتیز المنتج من العزلة المحلیـة p. aeruginosa بالترسیب بملح کبریتات الامونیوم بنسبة اشباع تراوحت بین(80-20%) وان النسبة 60% هی الافضل فی الترسیب اذ اعطت فعالیة نوعیة قدرها 32.03 وحدة/ملغم بعدد مرات تنقیة 1.60مرة وحصیلة انزیمیة33.69%, وادى امرار المحلول الانزیمی على عمود المبادل الایونی deae-cellulose الى زیادة نقاوة الانزیم اذ ارتفعت الفعالیة النوعیة الى 57.68 وحدة/ملغم وعدد مرات تنقیة الى 2.89مرة وبحصیلة انزیمیة 35%. جمعت الاجزاء التی اظهرت فعالیة انزیمیة عالیة واخضعت لعملیة الفصل بطریقة الترشیح الهلامی بعمود هلام sephadex-g200اعطت هذه الخطوة فعالیة نوعیة 34.87وحدة/ملغم وعدد مرات تنقیة 1.74مرة وحصیلة انزیمیة مقدارها 32.16%.وبینت نتائج توصیف الانزیم ان الرقم الهیدروجینی الامثل ودرجة الحرارة المثلى لفعالیته بلغت 6.5 و 45 م على التوالی, واعطى الانزیم اعلى فعالیة انزیمیة عند حضنه عند الرقم الهیدروجینی ودرجة الحرارة اعلاه.