طراحی و ساخت سازه ژنی ایمنوتوکسین ضد egfr viii متصل به اگزوتوکسین a سودوموناس ائروجنوزا برای سرطان گلیوبلاستوما

مقدمه: سرطان از رایج ترین علل مرگ و میر انسانی در جوامع امروزی است که تلاش‌های بسیار گسترده‌ای برای مقابله با آن در حال انجام است. ایمونوتوکسین‌های مبتنی بر anti-egfrviii می‌توانند با هدایت بخش‌های توکسینی به سلول‌های سرطانی که بیان بیش از حد گیرنده egfrviii دارند منجر به مرگ سلولی آنها شوند.مطالعه حاضر توسعه یک ایمونوتوکسین انسانی جدید ضد egfrviii egfrviii) (huscfv-pe38با ادغام ژنتیکی آنتی بادی تک زنجیره ای ضد egfrviii انسانی با اگزوتوکسین a کوتاه شده سودوموناس آئروژینوزا (pe) (pe38kdel) است.روش کار: قطعه pe-38 اگزوتوکسین a با استفاده از pcr تکثیر و به pet22b-antiegfrviii huscfv متصل شد. واکنش با روش pcr وهضم آنزیمی تایید شد. ایمونوتوکسین حاصل در e. coli bl21 (plyss) بیان شد و سپس توسط ستون کروماتوگرافی ni-nta تخلیص شد. پس از آن، واکنش ایمونوتوکسین تخلیص شده با روش‌های الایزا و mtt مورد ارزیابی قرار گرفت.یافته‌ها: آزمایش‌های pcrو هضم آنزیمی، صحت و یکپارچگی ساختار ایمونوتوکسین طراحی شده را تایید کردند. تخلیص ایمونوتوکسین بیان شده توسط ستون کروماتوگرافی نیکل منجر به ساخت یک ایمونوتوکسین نوترکیب بسیار خالص گردید که وزن مولکولی 63 کیلو دالتون را در ژل sds-page نشان داد.نتیجه‌گیری: نتایج  مطالعه حاضر نشان داد که ایمونوتوکسین طراحی شده می‌تواند به عنوان یک کاندید امیدوارکننده برای مهار سول های سرطانی egfrviii مثبت در نظر گرفته شود.

design and construction of genetic construct expressing anti-egfr viii immunotoxincontains exotoxin a of pseudomonas aeruginosa for glioblastoma cancer

introduction: cancer is one of the most common causes of human mortality in today’s societies, and extensive efforts are being made to combat it. egfrviii is a tumor-specific antigen that is not observed in normal tissues, making it possible to target cancerous tissues without damaging normal tissues. anti-egfrviii-based immunotoxins can lead to the death of cancer cells that express an excessive amount of the egfrviii receptor by directing toxic components to these cells.objectives: the objective of the present study is to develop a new human immunotoxin against egfrviii (huscfv-pe38) by genetically fusing a single-chain human anti-egfrviii antibody with a truncated form of the pseudomonas aeruginosa exotoxin a (pe) (pe38kdel).materials and methods: the pe-38 exotoxin a fragment was amplified using pcr and attached to pet22b-antiegfrviii huscfv. the reaction was confirmed by pcr and enzymatic digestion. the immunotoxin was expressed in e. coli bl21 (plyss) and then purified using ni-nta chromatography. after that, the purified immunotoxin reaction was evaluated using elisa methods.results: the pcr and restriction digestion experiments confirmed the accuracy and integrity of the designed immunotoxin structure. purification of the expressed immunotoxin using ni-nta chromatography column resulted in a highly pure, non-recombined immunotoxin with a molecular weight of 60 kda shown on sds-page gel.conclusion: the results of this study demonstrate that the designed immunotoxin was successfully cloned, expressed, and purified, and can be considered as a promising candidate for the inhibition of egfrviii-positive cancer cells.