بررسی تاثیر مهاری پروبیوتیک مهندسی شده لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس بیان کننده پپتید tachyplesin i خرچنگ نعل اسبی بر رشد سودوموناس آئروژینوزا

مقدمه­: پروبیوتیک ها میکرو ارگانیسم های زنده ای هستند که مصرف کافی آنها سبب نمایان شدن اثرات سلامت بخش در بدن میزبان می شود. هدف از این تحقیق تولید و بررسی اثرات باکتری پروبیوتیک لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس بیان کننده پپتید tachyplesin i خرچنگ نعل اسبی بر رشد سودوموناس آئروژینوزا است.روش کار: پلاسمید نوترکیب  pnz8148-tachyplesin iحاوی ژن tachyplesin i به روش شوک حرارتی وارد باکتری e.coli شد و سپس تخلیص گردید. وکتور نوترکیب حاوی ژنtachyplesin i  به روش الکتروپوریشن وارد باکتری لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس شد و غربالگری توسط آنتی­بیوتیک کلرامفنیکل و pcr انجام گرفت. سپس تاثیر مهاری باکتری لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس مهندسی شده بر روی رشد سودوموناس آئروژینوزا بررسی و با دیسک های آنتی بیوتیکی مقایسه گردید. یافته ها: ورود پلاسمید pnz8148-tachyplesin i درون باکتری لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس توسط کلرامفنیکل و واکنش pcr تایید شد. سپس مشخص گردید که باکتری مهندسی شده اثر مهاری بر روی رشد باکتری بیماری زای سودوموناس آئروژینوزا داشت به صورتیکه قطر هاله عدم رشد ایجاد شده بر روی سودوموناس آئروژینوزا تحت تاثیر لاکتوباسیلوس مهندسی شده قابل قبول بود. پس از مقایسه قطر هاله های دیسک های آنتی بیوتیکی آمپیسیلین و کلرامفنیکل با لاکتوباسیلوس مهندسی شده و انجام آنالیز آماری، تفاوت معنی داری در هاله عدم رشد گزارش نشد (p-valu<0/05)، اما قطر هاله حاصل از تتراسایکلین با هاله حاصل از لاکتوباسیل مهندسی شده دارای تفاوت آماری معنی داری بود. نتیجه گیری : با توجه به این که حضور ژنtachyplesin i  درون لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس تایید شد، هاله عدم رشد حاصل از آن در اطراف سودوموناس آئروژینوزا نشان دهنده این مطلب است که بیان و ترشح ژن tachyplesin i  لاکتوباسیلوس اثری مشابه آنتی بیوتیک بر سودوموناس آئروژینوزا دارد.

investigation of the inhibitory effect of lactobacillus acidophilus engineered probiotic expressing tachyplesin i horseshoe peptide on the growth of pseudomonas aeruginosa

introduction: probiotics are living micro-organisms whose sufficient consumption causes health-giving effects to appear in the host’s body. the purpose of this research is to produce the effects of lactobacillus acidophilus probiotic bacteria expressing horseshoe crab tachyplesin i on the growth of pseudomonas aeruginosa. methods: plasmid pnz8148-tachyplesin i containing tachyplesin i gene was introduced into e.coli by heat shock method. the recombinant vector was introduced into lactobacillus acidophilus bacteria by electroporation and screening was done by chloramphenicol antibiotic and pcr. then, the inhibitory effect of the engineered lactobacillus acidophilus bacteria on the growth of pseudomonas aeruginosa was investigated and compared with antibiotic discs. findings: plasmid pnz8148-tachyplesin i entry into lactobacillus acidophilus was confirmed by chloramphenicol and pcr. then it was determined that the engineered bacteria had an inhibitory effect on the growth of the pathogenic bacterium pseudomonas aeruginosa, so that the diameter of the halo of non-growth created on pseudomonas aeruginosa under the influence of the engineered lactobacillus was acceptable. after comparing the halo diameters of ampicillin and chloramphenicol antibiotic discs with engineered lactobacillus and conducting statistical analysis, no significant difference was reported in the non-growth halo (pvalue<0.05), but the halo diameter of tetracycline with the aura obtained from the engineered lactobacillus had a statistically significant difference. conclusion: considering that the presence of the tachyplesin i gene in lactobacillus acidophilus was confirmed, the lack of growth caused by it around pseudomonas aeruginosa indicates that the expression and secretion of the lactobacillus tachyplesin i gene has an antibiotic-like effect on pseudomonas aeruginosa.