اثرحذف ژن موثر در بروز سرطان uca1 با تکنیک نوین ویرایش ژنی crispr/cas9 در رده سلولی سرطان تخمدان

مقدمه: lncrnaها در رشد سلول، رونویسی، ترجمه و آپوپتوز نقش دارند. uca1 نوعی lncrna مهم است که با پیشرفت سرطان تخمدان ارتباط دارد. بیش از نیمی از زنان مبتلا به سرطان تخمدان در کمتر از پنج سال بعد از تشخیص، از بین می روند. هدف از این تحقیق حذف ژن uca1 با urothelial carcinoma associated 1 استفاده از تکنیک پیشرفته crispr /cas9 در سلول sk-ov-3 و تعیین اثر آن بر پیشرفت سرطان و آپوپتوز است.  روش کار: ابتدا با نرم افزار chopchop ، دو نوع sgrna‌ برای uca1 طراحی گردید. این sgrna‌ها پس از سنتز، در دو وکتور pscas9 به صورت جداگانه کلون شدند. سلول های sk-ov-3، با دو وکتور حامل sgrna‌ها، ترانسفکت شدند. پس از تایید عملکرد صحیح crispr در این سلول ها، بیان ژن های p53 ، bak, bax و fas  و آنتی‌آپوپتوزی bcl2 و survivin به روش real time pcr ارزیابی گردید. همچنین میزان تکثیر سلولی و آپوپتوز با mtt و فلوسیتومتری بررسی شد.یافته ها: نتایج نشان دهنده حذف موفق ژن uca1 در رده سلولی sk-ov-3 بود. بیان ژن های p53، bak, bax و fas در سلول های دستورزی شده نسبت به سلول های شاهد، به صورت معنی داری افزایش بیان نشان داد (p˂0.05). همچنین، کاهش بیان ژن های bcl2 و survivin در سلول های دچار حذف ژن نسبت به گروه شاهد، دیده شد (p˂0.05). نتایج mtt و فلوسیتومتری موید کاهش تکثیر سلولی و افزایش آپوپتوز بود. نتیجه گیری: حذف ژن uca1 در سلول sk-ov-3، اثرات مثبت در کاهش تکثیر و افزایش آپوپتوز نشان داد، لذا جلوگیری از بیان ژن uca1، نقش موثر در کنترل رشد سلول های سرطان تخمدان دارد.

evaluation of the effects of uca1 gene knockout with a new crispr/cas9 gene editing technique in ovarian cancer cell line

introduction:lncrnas play their roles in cell growth, transcription, translation, and apoptosis. uca1 is a type of lncrna has a direct relationship with ovarian cancer. more than half of the women with ovarian cancer die within less than five years from the disease diagnosis. this study aims to knockout of uca1 gene using the crispr/cas9 technique in sk-ov-3 cell and studying its effect on cell factors involved in cancer progress and apoptosis.materials and methods:two types of sgrnas for uca1 gene were designed. sgrnas were cloned after synthesis in two vectors of px459. the sk-ov-3 cell was transfected with two vectors carrying sgrnas. the expression of fas, bak, bax, and p53 pro-apoptosis genes and bcl2 and survivin anti-apoptosis genes were evaluated using the q-pcr. besides, the cell proliferation rate and apoptosis induction were studied using mtt and flowcytometry.results:the result showed the successful knockout of the uca1 gene in the sk-ov-3 cell line. the expression of fas, bak, bax, and p53 genes showed a meaningful increase related to the expression in manipulated cells compared to control cells (p˂0.05). also, the expression decrease of bcl2 and survivin genes was seen (p˂0.05). mtt and flow cytometry results confirmed the cell proliferation decrease and the apoptosis increase.conclusion:uca1 gene knockout in the sk-ov-3 showed some positive effects in decreasing cancer cell proliferation and increasing the apoptosis rate can be said that inhibiting overexpression of the uca1 gene will play a positive role in controlling the growth of ovarian cancer cells.