معرفی یک روش بهینه تخلیص dna ژنومی توکسوپلاسما گوندی از مغز موش صحرایی جهت افزایش کارایی تشخیص عفونت توکسوپلاسما

زمینه و هدف: استخراج dna ژنومی توکسوپلاسما گوندی از مغز موش صحرایی به دلیل میزان ناچیز آلودگی و چربی زیاد مغز چالش برانگیز است. واکنش کمی زنجیره ای پلیمراز در زمان واقعی (rt-qpcr) علیرغم تشخیص مقادیر ناچیز ژن هنوز با نتایج منفی-کاذب همراه است. ما با تغییر روش استخراج dna از بافت مغز موش توانستیم تعداد موارد منفی-کاذب آلودگی به توکسوپلاسما گوندی را کاهش دهیم. روش ‌ها: از مغز یازده موش (نر ویستار) آلوده به سوش تهران انگل توکسوپلاسما (در هفته هشتم آلودگی ) و سه موش غیرآلوده استفاده شد. جهت تخلیص dna بجای 20 میلی ‌گرم مغز (روش معمولی) کل مغز استفاده شد. میزان آنزیم پروتئیناز کا دو برابر و مدت انکوباسیون شش برابر روش معمول شد. سپس میزان dna نمونه ‌ها با روش rt-qpcr اندازه ‌گیری شد. یافته‌ ها و نتیجه ‌گیری: با روش رایج از یازده موش آلوده فقط سه موش مثبت شدند در حالی که با بهینه ‌سازی تخلیص dna، نه موش مثبت تشخیص داده شدند.

Introducing an optimized method for purifying Toxoplasma gondii genomic DNA from rat brain to increase diagnosis efficiency of Toxoplasma infection

Background and Aim: Extraction of Toxoplasma gondii genomic DNA from rat brain is challenging due to low level of contamination and high fat content. Quantitative realtime polymerase chain reaction (RTqPCR) is associated with false negative results despite detecting small amounts of the gene. By changing method of DNA extraction, we could decrease number of false negative results.Methods: Brains of eleven male Wistar rats infected with Tehran strain of Toxoplasma parasite (with 8 weeks of parasite infection) and three uninfected rats were isolated. The whole brain was used to purify DNA instead of 20 mg brain in the conventional method. Amount of protein kinase was doubled and the incubation period increased to 6 times. Then DNA of the samples was measured by RTqPCR.Results and Conclusion: Only three of the eleven infected rats were infection positive by the conventional method, while nine mice were positive by the optimizing method. lrm;