نقش حفاظتی سیلیمارین و فلاونوئید‌های آرتیشو (cynara scolymus) در مقابل آپوپتوزیس نورون‌های حرکتی قطعات کشت شده نخاع موش‌های سوری بالغ

مقدمه: مرگ نورون های حرکتی در کشت قطعات نخاع از نوع آپوپتوزیس می باشد و استرس اکسیداتیو می ‌تواند یکی از مکانیسم های دخیل در این پدیده محسوب شود. سیلیمارین به عنوان یک آنتی ‌اکسیدان قوی قادر است استرس اکسیداتیو را مهار نماید. با توجه به اینکه فلاونوئید های آرتیشو منبع غنی از سیلیمارین می‌ باشند هدف از این پژوهش بررسی اثر سیلیمارین و فلاونوئید های آرتیشو بر آپوپتوزیس نورون های حرکتی قطعات کشت شده نخاع موش بود.روش ‌ها: نخاع سینه ای موش های سوری ماده بالغ به قطعات 500 میکرونی بریده و این قطعات به 4 گروه تقسیم شدند: 1 قطعات لحظه صفر که بلافاصله فیکس شدند. 2 قطعات گروه کنترل که حلال سیلیمارین و فلاونوئید ها را دریافت کردند. 3 قطعات تیمار شده با سیلیمارین (200 میکرو مولار) 4 قطعات تیمار شده با فلاونوئید های استخراج شده از آرتیشو (10 میکروگرم بر میلی لیتر). قطعات گروه 2 تا 4 به مدت 6 ساعت در محیط کشت نگه داری شدند. سپس قطعات کشت شده فیکس و پس از شستشو برش گیری شدند. جهت بررسی جنبه ‌های مورفولوژیکی آپوپتوزیس از رنگ آمیزی هوخست و پروپیدیوم آیوداید استفاده شد. جهت ارزیابی پراکسیداسیون لیپید و ظرفیت کل آنتی اکسیدانی در قطعات نخاع به ترتیب از سنجش مالون دی آلدهید (mda) و قدرت آنتی اکسیدانی/ احیا کنندگی آهن سه ظرفیتی (frap)استفاده شد.یافته‌ها: نورون های حرکتی قطعات نخاع کشت شده برای به مدت 6 ساعت مشخصات مورفولوژیکی آپوپتوزیس شامل چروکیدگی سلول، متراکم شدن هسته و کروماتین را در مقایسه با نورون های لحظه صفر نشان دادند. در این زمان، میزان mda و frap در قطعات نخاع نسبت به قطعات لحظه صفر به ترتیب افزایش و کاهش یافت. استفاده از سیلیمارین و فلاونوئید های آرتیشو به‌ طور جداگانه پس از 6 ساعت، نسبت به گروه کنترل، توانست جنبه های مورفولوژیکی آپوپتوزیس را در نورون های حرکتی به تاخیر بیندازند و میزان mda قطعات نخاع را کاهش دهد. نتیجه گیری: سیلیمارین و فلاونوئیدهای آرتیشو با خاصیت آنتی‌ اکسیدانی خود توانستند آپوپتوزیس نورون های حرکتی قطعات کشت شده نخاع موش های بالغ را مهار نمایند.

Protective effect of silymarin and Artichoke (Cynara scolymus) flavonoids against apoptosis of cultured spinal cord the motor neurons of adult mice

Introduction: Motor neurons in cultured spinal cord slices die through apoptosis and oxidative stress might be one of the contributing mechanisms in this process. Silymarin is a potent antioxidant and is able to inhibit oxidative stress. Artichoke flavonoids are a rich source of silymarin. The aim of this study was to investigate the effect of silymarin and artichoke flavonoids on apoptosis of motor neurons in cultured slices of mice spinal cord.Methods: The thoracic region of spinal cord from female adult mice was cut into 500 micro;m slices. The slices were divided into four groups: 1) slices at time 0 that were fixed immediately, 2) control slices that received solvent of silymarin and flavonoids, 3) Slices that were treated with silymarin (200 micro;M), 4) Slices that were treated with flavonoids of artichoke (10 micro;g/mL). The slices of groups 24 were cultured for 6 h, fixed and sectioned using a cryostat. To study morphological features of apoptosis, the sections were stained with Hoechst and propidium iodide. Malondialdehyde (MDA) as lipid peroxidation index and ferric reducing ability as a measure of antioxidant power (FRAP) were measured in the spinal cord slices.Results: Spinal motor neurons cultured for 6 h, showed morphological features of apoptosis including cell shrinkage as well as nuclear and chromatin condensation compared to the time 0. MDA level increased and FRAP decreased in the spinal cord slices. Silymarin and artichoke flavonoids delayed apoptosis in the motor neurons and decrease the amount of MDA in the spinal cord slices compared to control.Conclusion: Silymarin and artichoke flavonoids delay apoptosis of motor neurons in cultured spinal cord slices of adult mice.