تعیین دقیقترین روش از بین چند روش مختلف بافت‌شناسی جهت ارزیابی اثربخشی ترکیبات محافظ نرونی در مدل حیوانی بیماری ​مولتیپل‌اسکلروزیس

زمینه و هدف: در این مطالعه دقیقترین روش بافت شناسی جهت ارزیابی اثربخشی ترکیبات محافظ نرونی در مدل حیوانی بیماری ام اس بررسی گردیده است .روش‌ها: موش‫های c57bl/6 به مدت 6 هفته در گروه های: کنترل، کنترل + بنزوآریک اسید (mg/kg 80، 40 و 20 در 2 هفته آخر)، کوپریزون (0/2 %) جهت تخریب نرونی (مدل ام اس) و کوپریزون + بنزوآریک اسید تحت بررسی قرار گرفتند. در پایان هفته ششم میزان آسیب میلین توسط آزمون های‫ ایمونوهیستوشیمی (ihc)، رنگ آمیزی های هماتوکسیلینائوزین (h e) و لوکسال فست بلو (lfb) و همچنین تصویربرداری میکروسکوپ الکترونی عبوری (tem) ارزیابی گردید.یافته‌ها: در گروه‫ کوپریزون هر چهار روش تخریب معنادار میلین را در مقایسه با گروه کنترل نشان دادند (p<0.001). در روش lfb حتی بالاترین غلظت بنزوآریک اسید نیز نتوانست در مقایسه با گروه کوپریزون بهبود معناداری را نشان دهد. سایر روش ها شامل ihc، h e و tem همگی تفاوت معناداری در اثرات حفاظتی غلظت‫ زیاد بنزوآریک اسید در مقایسه با گروه کوپریزون نشان دادند. تنها در نتایج حاصل از روش tem بود که در غلظت متوسط بنزوآریک اسید نیز اثرات حفاظتی معناداری مشاهده شد (p<0.05). نتیجه‌گیری: tem به‫عنوان حساس‫ترین و lfb بعنوان ضعیف ترین روش شناخته شدند. همچنین نتایج این مطالعه استفاده همزمان از روش‫های دیگر چون h e جهت بررسی میزان التهاب عصبی و ihc جهت تایید نتایج tem را پیشنهاد می کند. توصیه می‫شود در صورت عدم دسترسی به روش‫های فوق به‫روش‫های دارای دقت زیاد مانند tem و ihc اتکا شود.

Determination of the most accurate technique among various histological methods for evaluation of the efficacy of neuroprotective agents in animal model of multiple sclerosis

Background and aims: Here we aimed to comprise several histological methods to determine the most accurate technique for evaluation of efficacy of neuroprotective agents in animal model of multiple sclerosis (MS).Methods: Male C57BL/6 mice were treated for 6 weeks in control, control + Benzoraic acid (BA, as neuroprotective agent) 20, 40, 80 mg/kg during last 2 weeks, Cuprizone (0.2%) as demyelinating agent, and Cuprizone (0.2%) + BA (20, 40, 80 mg/kg during last 2 weeks) groups. At the end of experiment, histological examinations including immunohistochemistry (IHC), Hematoxylin Eosin (H E) staining, Luxol Fast Blue (LFB) staining, and Transmission Electron Microscopy (TEM) techniques were performed for evaluation of myelin damages.Results: Significant myelin damage was detected by all of the used histological methods in Cuprizone group (p < 0.001 compared to control group). LFB technique could not show improvement in damages by all doses of BA. The H E, IHC and TEM methods showed significant protective effects of the high BA dose compared to Cuprizone group. Only the TEM method could show significant (p < 0.05) protective effect of the medium BA dose.Conclusion: TEM was the most and LFB was least sensitive methods. Present study suggests simultaneous using of methods such as H E for better assessment of neuroinflammation and IHC for confirmation of TEM results. Moreover, in the case of restriction in methods, TEM and IHC are the most sensitive methods and could provide reliable results related to efficacy of neuroprotective agents in this model.