induced chondrogenic differentiation of hescs by hesc-derived mscs conditioned medium and sequential 3d-2d culture system

Background and aims: it has been proven that human mesenchymal stem cells (mscs) conditioned medium (hmscs-cm) can influence human embryonic stem cells (hescs) chondrogenic differentiation. in this study, we hypothesized that conditioned medium (cm) from hescs-derived mscs in a sequential 3d-2d culture system could facilitate the induction of chondrogenesis in hescs.materials and methods: cm was collected from yazd2 (hescs; 46, xy) derived mscs confluent cultures and stored at -20 °c. yazd4 hesc line (46, xx) was induced for differentiation using eb formation as 3d culture into sd (spontaneously differentiation) and cm groups (differentiation using conditioned medium) for four days. cell culture continued in a 2d (monolayer) culture system for both groups till day 14. ultimately, chondrogenic differentiation was assessed by alcian blue and masson′s trichrome staining at 4 and 14 days of differentiation, and quantitative real-time polymerase chain reaction (pcr) for nanog, meox1, sox5, sox6, sox9, acan, col2a1 and runx2 genes for sd and cm groups on days 0 and 4.results:  the gene expression profile for chondrogenic genes in the cm group was significantly more than the sd group (p< 0.05). furthermore, chemical staining assessment illustrated a significant gag and collagen ii difference between the cm and sd groups at days 4 and 14 (p< 0.05).conclusions: our findings would pave the way for creating an in vitro human chondrogenesis model for further studies in the developmental biology of articular cartilage tissue, which lend itself to cell-based therapy to cure joint diseases such as osteoarthritis.

بررسی اثر محیط شرطی سلول های بنیادی مزانشیمی مشتق شده از سلول های بنیادی رویانی و سیستم کشت متوالی سه بعدی و دو بعدی بر تمایز کندروژنیک سلول های بنیادی رویانی انسانی

زمینه و هدف: ثابت شده است که سلول های بنیادی مزانشیمی انسانی (MSCs) محیط شرطی شده (hMSCs-CM) می توانند بر تمایز غضروفی سلول های بنیادی جنینی انسان (hESCs) تأثیر بگذارند. در این مطالعه، ما فرض کردیم که محیط شرطی شده (CM) از سلول های بنیادی مزانشیمی مشتق از hESCها در یک سیستم کشت متوالی 3D-2D می تواند القای غضروف در hESCها را تسهیل کند.مواد و روش ها:CM از کشت های MSCs های مشتق شده از Yazd2 (hESCs; 46, XY) جمع آوری شد و در دمای 20- درجه سانتی گراد نگهداری شد. جهت القای تمایز لاین hESC یزد4 (46، XX) از طریق تشکیل اجسام شبه رویانی (EB) به عنوان کشت سه بعدی در دو گروه SD (تمایز خود به خودی) و CM (تمایز با استفاده از محیط شرطی شده) به مدت چهار روز کشت داده شد. کشت سلولی در یک سیستم کشت 2 بعدی (تک لایه) برای هر دو گروه تا روز 14 ادامه یافت. در نهایت، تمایز غضروفی با رنگ آمیزی تری کروم و آلسیان بلو در 4 و 14 روز تمایز، و Real time-PCR کمی برای بررسی بیان کمی نسبی ژن های NANOG MEOX1، SOX5، SOX6، SOX9، ACAN، COL2A1 و RUNX2 برای گروه های SD و CM در روزهای 0 و 4 انجام پدیرفت.نتایج: نتایج بررسی کمی بیان ژن برای ژن های غضروفی در گروه CM به طور معنی داری بیشتر از گروه SD بود (P value<0.05). علاوه بر این، ارزیابی رنگ‌آمیزی شیمیایی تفاوت معنی‌داری را در حضور GAG و کلاژن II بین گروه CM و SD در روزهای 4 و 14 نشان داد (P value<0.05).