reduction of purification time of polyspecific equine f(ab´)2 antivenom against scorpion envenomation

Background and aims: in this study we improved the purification of immunoglobulins from equine antiserum raised against the venom of 6 types of scorption species. caprylic acid (octanoic acid), a fatty acid, was found to have no effect on the activity of the enzymes pepsin, which is used in antivenom purification to digest fc fragment of immunoglobulins to obtain f(ab acute;)2.materials and methods: a new method was developed for the production of f(ab acute;)2 antivenom whereby whole equine antiserum was mixed with equal amount of 0.15 m hcl and ph 3.4 with pepsin 660 mg/l of diluted antivenom and incubated for 4 h at 37 °c. after digestion the ph were brought to 4.8 with sodium hydroxide solution (1.5 m) and then 1.5% caprylic acid and 10% ammonium sulfate was added and mixed for 60 minutes and passed through filter paper.results: caprylic acid caused precipitation of albumin, and ammonium sulfate reduced turbidity of solution, resulting in a reduced protein load presented to the digestion enzymes culminating in substantial reductions in processing time.conclusions: the equine f(ab acute;)2 obtained using these novel caprylic acid methods were comparable in terms of yield, purity and specific activity to those obtained by multistep and time consuming conventional salt fractionation with ammonium sulfate.

کاهش زمان تصفیه آنتی ونوم پلی والان F (ab´)2 اسبی علیه عقرب زدگی

روشهایی که امروزه توسط تولید کنندگان آنتی ونوم در سراسر جهان برای تولید آنتی ونوم های تغلیظ و تخلیص شده و فراکسیونهای حاصل از هضم آنزیماتیک گاماگلبولین استفاده می شود، درحقیقت روش پیشرفته تر از روش اولیه ای است که در سال 1938 توسط pop ابداع شد.در این مطالعه که روش تصفیه ایمونوگلوبولین های تولید شده در اسب علیه شش گونه عقرب است، از کاپریلیک اسید (اکتانوئیک اسید) یک اسید چرب می باشد، استفاده می شود و هیچ تاثیری بر فعالیت آنزیم پپسین که در تصفیه آنتی ونوم ها در مرحله هضم Fc فراگمان ایمونوگلوبولین ها برای بدست آوردن F(ab)2 مورد استفاده قرار می گیرد، ندارد. روش جدید برای تولیدآنتی ونوم های F(ab)2 بکار می رود که در این روش آنتی سرم با مقدار مساوی از هیدروکلریکاسید 0/15 مولار مخلوط شده تا pH=3/4 بدست آید و سپس پپسین به میزان660mg/L آنتی ونوم رقیق شده اضافه شده و برای مدت 4 ساعت در دمای C °37 قرار می گیرد تاهضم انجام شود. سپس pH را روی 4/8 با سدیم هیدروکسید 1/5 مولار تنظیم کرده، 1/1 درصد کاپریلیک اسید و 10 درصد سولفات آمونیوم اضافه و برای مدت 60 دقیقه مخلوط شده واز کاغذ صافی عبور داده می شود. کاپریلیک اسید با رسوب آلبومین و آمونیوم سولفات باعث کاهش کدورت می شود که نتیجه آن کاهش زمان هضم آنزیمی در فرآیند تصفیه سرم می باشد. F(ab)2 تولید شده در اسب با استفاده از روش جدید تصفیه با کاپریلیک اسید از نقطه نظر بازده، خلوص و فعالیت ویژه قابل مقایسه با روش چند مرحله ای و زمان بر آمونیوم سولفات می باشد.