کلونینگ و بیان ژن آنزیم فیتاز در باکتری اشرشیا اکلی جهت بازیابی آنزیم در شرایط آزمایشگاهی

مقدمهپروتئین فیتاز آنزیمی است که توانایی تجزیه‌ی فیتیک اسید به میواینوزیتول و فسفات معدنی را دارا می‌باشد و از این آنزیم به صورت گسترده‌ای به عنوان یک افزودنی در غذای حیوانات استفاده می‌شود. هدف از این مطالعه دستیابی به  تولید میزان بالایی از آنزیم فیتاز باکتریایی در وکتور بیانی pet26b در میزبان باکتریایی بود.مواد و روش هاجهت تولید آنزیم فیتاز نوترکیب، ژن هدف به وکتور بیانی pet-26b- وارد شد و وکتور نوترکیب پس از تکثیر در باکتری اشریشیاکلی dh5α به باکتری اشریشیاکلی bl21 به عنوان میزبان بیان منتقل شد. برای جداسازی فیتاز نوترکیب از روش sds-page استفاده گردید و میزان تولید پروتئین نوترکیب با استفاده از الکتروفورز بررسی شد.یافته هاآنزیم فیتاز باکتریایی با موفقیت در باکتری اشریشیاکلی بیان شد و وزن مولکولی فیتاز نوترکیب تولید شده در حدود 85 کیلو دالتون تخمین زده شد. همچنین ph بهینه برای فعالیت آنزیم فیتاز باکتریایی نوترکیب در حدود 5/5 برآورد شد.نتیجه گیرینتایج بدست آمده نشان دهنده موفقیت در تولید آنزیم فیتاز در شرایط آزمایشگاهی با استفاده از میزبان bl21 با کمترین هزینه ممکن جهت استفاده در صنعت خوراکی طیور است.

cloning and optimization of phytase enzyme gene expression in escherichia coli

introductionphytase is an enzyme that has the ability to break down phytic acid into myoinositol and mineral phosphate, and widely uses as an additive in animal foods. the aim of this study was to achieve a high level of bacterial phytase expression in pet26b expression host.materials and methodsto generate the recombinant phytase enzyme, the target gene was introduced into the expression vector pet-26b-phytase, and the recombinant vector was transferred to escherichia coli bl21 as a host of expression after replication in e. coli dh5α. the sds-page method was used to isolate recombinant phytase and the amount of produced recombinant protein was investigated. by electrophoresis.resultsthe bacterial phytase enzyme was successfully expressed in escherichia coli and the molecular weight of recombinant phytase produced at about 85 kda was estimated. the optimum ph for recombinant bacterial phytase was estimated at 5.5.conclusionthe results showed that phytase derived from escherichia coli due to its low production cost and high production of recombinant phytase is a desirable alternative for use in domestic animal feed industry.