القا بیان پروتئین نوترکیب drsb1-cbdavr4 در ریشه‌های مویین و نا‌به‌جا گیاهان تراریخت t1

ریشه های مویین و نا‌به‌جا برای بیان پروتئین های نوترکیب کارآمد هستند. در مطالعه حاضر به بررسی مقایسه میزان پروتئین نوترکیب drsb1-cbdavr4 در ریشه های مویین و نا‌به‌جا پرداخته شد. برای این منظور ابتدا، تاثیر عوامل مختلف بر بهینه سازی شرایط کشت برای تولید ریشه هایی نا‌به‌جا و مویین در سه آزمایش جداگانه با ارزیابی تولید زیست توده در گیاه تراریخت drsb1-cbdavr4 مورد بررسی قرار گرفت. صحت تولید ریشه های القاء شده توسط اگروباکتریوم رایزوژنز و با آغازگر های اختصاصی ژن rolc تایید شد. همچنین با استفاده از pcr، ورود ژن های پپتید نوترکیب درماسپتین b1 در ژنوم کلون های ریشه های مویین و نا‌به‌جا اثبات شد. سطح پروتئین نوترکیب با استفاده از آنالیز elisa عصاره های کلون ریشه‌های موئین و نا‌به‌جا اندازه گیری شد. تجزیه واریانس داده های حاصل از تولید و القا ریشه نا‌به‌جا نشان داد که بیشترین تعداد و بلندترین طول ریشه در محیط های ms حاوی 1 میلی‌گرم بر لیتر naa و 0.5 میلی گرم بر لیتر iba به دست آمد. نتایج حاصل از زیست توده ریشه نا‌به‌جا نشان داد که محیط ms مایع حاوی 1 میلی گرم بر لیتر از هورمون naa روی میزان تولید زیست توده اثرات معنی داری (p ≤ 0.01) دارند. بیشترین زیست توده در محیط کشت ms حاوی میزان 1 میلی‌گرم بر لیتر هورمون naa به‌دست آمد و کمترین وزن تر و خشک در محیط ms 1/4بدون هورمون naa به دست آمد. همچنین نتایج این مطالعه نشان داد که سویه atcc15834، در محیط ms همراه با ساکارز 3 درصد با مدت‌زمان تلقیح 10 دقیقه بهترین ترکیب تیماری جهت تحریک ریشه مویین در گیاه تراریخت بود. نتایج elisa نشان داد که کلون های به دست آمده از هر دو ریشه تفاوت معنی داری از نظر میزان غلظت پروتئین کل نشان دادند. میزان پروتئین نوترکیب حاصل از کلون های ریشه مویین به‌مراتب بیشتر از پروتئین ریشه نابه‌جا بود.

induction of drsb1-cbdavr4 recombinant protein in hairy and adventitious roots of t1 transgenic plants

hairy and adventitious roots are efficient systems for expressing recombinant proteins. in the present study, the amount of drsb1-cbdavr4 recombinant protein in hairy and adventitious root systems was compared. to this end, the effect of different factors on the optimization of culture conditions to obtain adventitious and hairy roots was evaluated in three separate experiments by assessment of biomass production in t1 transgenic plants expressing drsb1-cbdavr4 recombinant protein. the efficacy of agrobacterium rhizogenesis in producing hairy roots was ensured using rolc gene specific primers. the insertion of drsb1-cbdavr4 recombinant peptide transgene in the genome of hairy and adventitious roots was confirmed by pcr analysis. also, the level of drsb1-cbdavr4 protein was measured in hairy and adventitious roots by elisa analysis. analysis of the variance of data showed that the highest number of roots and the longest roots were obtained in ms media supplemented with 1 mg/l naa and 0.5 mg/l iba. the results of adventitious root biomass showed that liquid ms medium containing 1 mg/l of naa hormone had a significant effect (p <0.01) on biomass production. more biomass was obtained in ms medium supplemented with 1mg/l naa, whereas a lower fresh and dry weight was obtained in a 1/4 ms medium with no naa. the results also showed that atcc15834 strain with ms media supplemented with 3% sucrose, 10 minutes inoculation time was high efficiency to induce hairy roots in tobacco plants. the results of elisa analysis showed that clones obtained from both roots showed a significant difference in terms of total protein content. the amount of recombinant protein from hairy roots was much higher than that of adventitious roots.