شناسایی و جداسازی سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونیا از بافت بیضه فیل‌ماهی (Huso Huso)

سلول های بنیادی اسپرماتوگونیا (sscs) سلول های منحصر به فردی هستند و می‌توانند اطلاعات ژنتیکی را به نسل بعد منتقل کنند، از این رو در تولید ماهی کایمر و حفاظت از گونه های کمیاب نقش مهمی دارند. این مطالعه برای اولین بار با هدف بررسی ویژگی های ظاهری سلول های اسپرماتوگونیا با روش بافت شناسی و سپس جداسازی آنها با روش هضم آنزیمی از بافت بیضه فیل ماهی (huso huso) اجرا شد. مطالعات بافت‌شناسی بیضه فیل‌ماهیان یک تا سه ساله نشان داد که دو نوع کلی سلول اسپرماتوگونیای تمایز نیافته (sscs) و تمایز یافته وجود دارد. sscs اغلب با اندازه بزرگ، پوشش هسته ای نامنظم، اجزای هسته ای مشخص و وجود یک تا دو هستک شناسایی شدند، به علاوه در ماهیان یک ساله فراوانی sscs به صورت معنی داری بالاتر از ماهیان دو و سه ساله بود (0/05>p). جداسازی سلول های بافت بیضه ماهیان یک ساله به وسیله هضم آنزیمی نشان داد استفاده از آنزیم تریپسین 0/1 درصد به همراه بافر فسفات به مدت 2 تا 3 ساعت در دمای 2016 درجه سانتی‌گراد کارایی بالاتری از نظر تعداد و زنده مانی سلول های اسپرماتوگونیای فیل‌ماهی داشت (0/05>p). این بررسی اطلاعات پایه ای را برای جداسازی sscs فیل‌ماهی به منظور پیوند آن برای تولید ماهی کایمر فراهم آورده است.

identification and isolation of sprmatogonial stem cells from beluga ( huso huso) testicular tissue

spermatogonial stem cells (sscs) are unique cells and able to transmit genetic information to the next generation, therefore, they play an important role in chimeric fish production and preservation of rare species. this study was performed for the first time with the aim of examining morphology of spermatogonial cells through histological method and then isolating them through enzymatic digestion method from beluga (huso huso) testicular tissue. histological examination of testicular tissue of one to threeyearold beluga showed there are two general types of spermatogonial cells, undifferentiated spermatogonia (sscs) and differentiated spermatogonia. sscs were often identified by their large size, irregular nuclear envelope, distinct nuclear components and one to two nuclei. moreover, in oneyearold fish the frequency of sscs was significantly higher than 2 and 3yearold beluga (p<0.05). isolation of testicular tissue cells of oneyearold beluga through enzymatic digestion was indicated that using 0.1% trypsin enzyme with phosphate buffer for 2 to 3 hours at 1620°c has higher efficiency based on frequency and viability of beluga spermatogonial cells (p<0.05). this study has provided basic information for isolation beluga sscs for transplantation to produce chimeric fish.