|
|
|
|
افزایش حلالیت آنزیم نوترکیب گلوتاتیون s- ترانسفراز استخراج شده از ماهی سفید (rutilus kutum) با استفاده از روش مبتنی بر چپرون در باکتری escherichia coli
|
|
|
|
|
|
|
|
نویسنده
|
تراضی سارا ,غفوری حسین ,صاری خان سجاد ,سریری ریحانه
|
|
منبع
|
فيزيولوژي و بيوتكنولوژي آبزيان - 1400 - دوره : 9 - شماره : 3 - صفحه:89 -108
|
|
چکیده
|
دستیابی به مقدار زیادی از پروتئین نوترکیب به صورت محلول یک نیاز اساسی و زیربنای بسیاری از پژوهش‌ها در تمام شاخه‌های بیوتکنولوژی است. به نظر می‌رسد بین روش‌های عمومی و اختصاصی موجود برای افزایش حلالیت پروتئین نوترکیب، بیان مشترک پروتئین مورد نظر با چپرون‌های مولکولی یک راه حل مناسب برای کمک به تا شدن صحیح پروتئین تازه سنتز شده و کاهش تجمعات پروتئینی باشد، با این حال اثربخشی چپرون‌های مختلف به طور گسترده‌ای متفاوت است. به منظور بررسی کارایی چپرون‌های ماهیان در افزایش حلالیت پروتئین‌های نوترکیب، در این مطالعه کلون‌سازی و بیان همزمان دو پروتئین hsp70 مربوط به اردک‌ماهی esox lucius (elhsp70) و گلوتاتیون s ترانسفراز کلاس µ از ماهی سفید rutilus kutum (rkgstµ) در میزبان e. coli انجام شد و به منظور بررسی برهم‌کنش دو پروتئین از آنالیز الکتروفورز یک بعدی و محاسبه فعالیت ویژه آنزیم rkgstµ استفاده شد. با توجه به این که حلالیت و فعالیت ویژه آنزیم rkgstµ در سلول‌های بیان کننده نسبت به نمونه‌های کنترل افزایش یافت، این مطالعه یافته امیدوارکننده دیگری در مورد نقش مثبت چپرون‌ها در افزایش محتوای محلول پروتئین‌های نوترکیب فراهم کرده است.
|
|
کلیدواژه
|
گلوتاتیون s- ترانسفراز، چپرون، پروتئین نوترکیب، تجمعات پروتئینی، حلالیت پروتئین
|
|
آدرس
|
دانشگاه گیلان, دانشکده علوم پایه, ایران, دانشگاه گیلان, دانشکده علوم پایه, گروه زیست‌شناسی, ایران, مرکز ملی ذخایر ژنتیکی و زیستی ایران, ایران, دانشگاه گیلان, دانشکده علوم پایه, گروه زیست‌شناسی, ایران
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Increasing the solubility of recombinant Glutathione S-transferase from Rutilus kutum using chaperone-based method in Escherichia coli
|
|
|
|
|
Authors
|
Tarazi Sara ,Ghafoori Hossein ,Sarikhan Sajjad ,Sariri Reyhaneh
|
|
Abstract
|
Attainment of soluble recombinant protein in high quantity is a critical demand in all types of biotechnology. Between the available general and proteinspecific techniques used for enhancing the protein solubility, the coexpression of desired protein with molecular chaperones seems to be a proper solution to assist the folding of newly synthesized protein and reduce the inclusion bodies formation, however the effectiveness of different chaperones varies widely. In order to evaluate the efficiency of fish chaperones in increasing the solubility of recombinant proteins, cloning and simultaneous expression of Esox lucius Hsp70 (ElHsp70) and the µclass glutathione Stransferase from Rutilus kutum (RkGSTµ) was performed on E. coli host. In order to investigate the proteinprotein interaction, the SDSPAGE electrophoresis and measuring the specific activity of RkGSTµ was applied. Since the solubility and specific activity of RkGSTµ were increased in coexpressing cells, this work has provided another promising finding on the positive role of chaperones in enhancing the soluble content of expressed recombinant proteins.
|
|
Keywords
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|