اندازه‌گیری کپک آسپرژیلوس نایجر در رب گوجه فرنگی به روش real time

در این تحقیق از روش مولکولی real time pcr برای اندازه‌گیری کپک آسپرژیلوس نایجر در رب گوجه فرنگی استفاده شد. به دلیل مشکلات روش شمارش کپک‌ها به روش howard method count از قبیل احتمال خطای آزمون کننده، دقت کم و عدم تکرار پذیری، تبیین یک روش استاندارد که بتواند با دقت و تکرار پذیری بالا تشخیص و شمارش کپک‌ها را امکان پذیر سازد ضروری به نظر می­رسد. روش مولکولی real time pcr می‌تواند به‌عنوان یک روش مناسب برای شناسایی و اندازه­گیری کمی دقیق کپک­ها مطرح باشد که بر مبنای اندازه­گیری مطلق و نسبی ژن‌های کپک­های موجود می باشد. نمونه‌های رب گوجه فرنگی با مقادیر مختلف اسپور کپک (1^10، 3^10 و 5^10) در هر گرم آلوده شد. پس از گرمخانه گذاری و رشد اسپور کپک و ایجاد میسیلیوم، استخراج dna از هر نمونه با استفاده از روش al-sammari انجام شد. سپس با استفاده از واکنش real time pcr تعداد copy number مربوط به dna کپک با استفاده از شناساگر سایبرگرین و پرایمرهای مربوط به جنس آسپرژیلوس نایجر تعیین شد. نتایج نشان داد که با افزایش مقدار dna کپک در نمونه‌های شاهد و تلقیح شده منحنی real time در مقادیر ct کمتری به فاز لگاریتمی وارد می شوند. ضریب همبستگی خطی منحنی استاندارد در آزمون real time 0.938=r^2 بود که نشان دهنده دقت تعیین کمی این آزمون می‌باشد. اختصاصی بودن واکنش با استفاده از منحنی ذوب پرایمرها تعیین شد و نشان داد که واکنش به طور کاملاً اختصاصی انجام شده است.