ارزیابی پنیر لیقوان ازنظر وجود باکتری لاکتوکوکوس گارویه با تکیه‌بر روش های مبتنی برکشت و روش مولکولی ژن ناحیه s rrna16

باکتری لاکتوکوکوس گارویه گونه بیماری‌زای جنس لاکتوکوکوس بوده که عامل بیماری در انسان (اندوکاردیت) و دام (لاکتوکوکوزیس در ماهی و ورم پستان در گاوهای شیری) است، وجود این باکتری در تولیدات حاصل از شیر خام همانند پنیر لیقوان گزارش شد است.در این پژوهش از شیر تازه، دلمه، پنیر تازه و پنیر رسیده و همچنین علف تازه منطقه لیقوان جهت ایزوله کردن باکتری استفاده گردید. آزمون­های بیوشیمیایی در دمای °c10 و °c45 و رشد در غلظت نمک طعام %4 و %6.5 صورت گرفت. سپس استخراج dna، و واکنش pcr به‌منظور شناسایی ژن ناحیه s rrna16 با پرایمر اختصاصی لاکتوکوکوس، انجام شد و آمپلیکون­های آن توسط شرکت source bioscience انگلستان تعیین توالی شدند. سپس در پایگاه داده های ژنی ncbi توالی هایی که بیش از %97 مشابهت داشتند، ازنظر جنس و گونه تعیین هویت شدند.در آغاز 1500 ایزوله سپس در ادامه توسط آزمون­های دیگر 625 ایزوله و درنهایت 60 ایزوله به‌عنوان لاکتوکوکوس انتخاب گردید سپس با تعیین توالی ژن ناحیه s rrna16 به‌طور دقیق 2 مورد لاکتوکوکوس گارویه، 2 مورد لویکونوستوک لاکتیس، 5 مورد لویکونوس توک مزونتروئیدس، یک مورد لویکونوستوک گارلیکوم و بیشترین تعداد یعنی 50 ایزوله لاکتوکوکوس لاکتیس گزارش شد.حضور کمرنگ باکتری لاکتوکوکوس گارویه که آن‌هم در مراحل اولیه تولید پنیر لیقوان بوده است، نوید خوبی برای ایمنی بیشتر پنیر لیقوان ازنظر وجود این باکتری بیماری‌زا می‌باشد چون در پنیر تازه و پنیر رسیده موردی از حضور این باکتری مشاهده نشد.

Evaluation of hygiene Lighvan cheese aspects regarding Lactococcus garvieae bacteria relying on culture-based and molecular methods

One of the pathogenic bacteria species in the genus of Lactococcus is Lactococcus garvieae. It causes human disease (endocarditis) and mastitis in dairy cows to appear. The presence of these bacteria in the raw milk products like Lighvan cheese was reported. Lighvan cheese is a traditional cheese which is made from raw sheep's milk.In this study, fresh milk, curd, Fresh cheese and ripe cheese, and fresh grass Lighvan area was used to isolate bacteria. Biochemical tests at 10°C and 45°C and grow in salt concentration 4% and 6.5 %, was performed. After extraction of DNA, PCR reaction with primers for genes of Lactococcus 16S rRNA performed and the products were sequenced by the company Source BioScience England, then in gene databases NCBI, the sequence of which more than 97% were similar in terms of genus and species were identified.At first, 1500 colonies similar to Lactococcal genera isolated from different sources such as fresh grass, fresh milk, curd, fresh cheese and ripened cheese according to colony morphology. Then, the 625 isolates were selected by gram stain. The biochemical tests carried out to select 60 isolates of Lactococcal genus and the PCR was used to determine the 16S rRNA gene sequence region to identify species. Based on molecular identification 50 species, were belonged to the Lactococcal genera and finally two species of Lactococcus were Lactococcus garvieae.According to the results, the presence of two species of Lactococcus garvieae (fresh milk and curd) was demonstrated in the early stages of Lighvan cheese production, But, there was no presence of the bacteria in fresh cheese and ripened cheese.