جداسازی و شناسایی باکتری های تولیدکنندۀ آنزیم کوتیناز

آنزیم کوتیناز جزء خانوادۀ آنزیمی سرین هیدرولازها بوده که توانایی هیدرولیز انواع استرها و پلی استرهای کوچک مانند کوتین را دارد. کوتین گیاهان از ترکیبات پلی استری هیدروکسی و اپوکسی اسید چرب تشکیل شده است که در مقابل آب نفوذناپذیر است و تنها باکتری های بیماری زای گیاهی قادر به تجزیۀ آن هستند. به منظور شناسایی این مقاومت، در ابتدا میوه های خیار (cucumis sativus' c. sativus')، سیب زرد (golden delicious apple 'malus domestica') ، سیب قرمز (red delicious apple 'malus domestica'') و گوجه فرنگی (solanum lycopersicum mill. commun ' s. lycopersicum') تهیه و از پوست این میوه ها به روش کلرفرم متانول، کوتین استخراج و میزان آن در این میوه ها مقایسه شد. سپس، با استفاده از محیط کشتی اختصاصی حاوی کوتین و سنجش فعالیت آنزیمی، جداسازی سویه های تولیدکنندۀ آنزیم انجام شد. از نمونه های غربال شده، dna استخراج شد و واکنش pcr به کمک پرایمرهای یونیورسال براساس 16s dna جهت شناسایی نمونه ها انجام گرفت. در ادامۀ مطالعات بیوانفورماتیک، شناسایی و ثبت نمونه ها در ژن بانک انجام شد. نتایج نشان می داد که درصد کوتین استخراج شده در سیب بیشتر است و احتمالاً سیب درمقابل آفات و بیماری ها مقاوم تر است. همچنین، شش سویۀ تولیدکنندۀ آنزیم کوتیناز از جنس klebsiella و enterobacter به کمک بررسی فعالیت آنزیمی و محیط کشت اختصاصی حاوی کوتین جداسازی و توالی کدکنندۀ ناحیۀ 16s dna این باکتری ها در ژن بانک ثبت شد