بیان هم‌زمان فاکتور رشد عصبی نوترکیب انسانی با چاپرون تریگر فاکتور در e. coli

فاکتور رشد عصبی (ngf) یک فاکتور نوروتروفیک است که در حفظ، بقا و تمایز سلول های سیستم عصبی نقش دارد. پروتئین ngf دارای سه زیر واحد است که زیر واحد βآن فعالیت اصلی را بر عهده دارد. این پروتئین از موتیف گره سیستئینی که در آن رشته های βبا پیوندهای دی سولفیدی به یکدیگر متصل شده اند، تشکیل شده است. ngf برای درمان بسیاری از بیماری ها استفاده می شود. به دلیل اینکه ngf استخراج شده از منابع طبیعی برای درمان نامناسب است، بسیاری از محققین برای تولید-ngf βنوترکیب تلاش کرده اند. در این مطالعه، به منظور افزایش بیان ngf، این پروتئین به طور هم زمان با چپرون trigger factor در e. coli بیان شد. بدین منظور pet39b(+):: βngf و پلاسمید چپرونی ptf16 به e. coli bl21(de3) انتقال یافتند. پس از القای هر پروموتر، کل محتوی پروتئینی و پروتئین های پری پلاسمی بطور جداگانه استخراج شدند. به منظور تایید تاثیر tfبر میزان بیان کلی و تولید ndash;ngf βمحلول، تکنیک های برادفورد و دات بلات و نرم افزار imagej استفاده شدند. سپس -ngf βبا استفاده از ستون کروماتوگرافی تمایلی (ni2+nta) تخلیص شد. همچنین به منظور مطالعه عملکرد ngf βتخلیص شده، رده سلول های pc12 با پروتئین به مدت یک هفته تیمار شدند. داده ها نشان دادند که بیان هم زمان با چپرون tf می تواند سبب افزایش تولید پری پلاسمی و محلول -ngf βو نه کل محتوی پروتئینی شود. همچنین تیمار سلول های pc12 با -ngf βتخلیص شده (بیان شده با چپرون tf)، منجر به تمایز سلول های pc12 به سلول های عصبی شد، که نشان دهنده عملکردی بودن پروتئین تولید شده است. داده های این مطالعه نشان دهنده این است که بیان هم زمان چپرون سیتوپلاسمی tf با پروتئین ngf ممکن است یک روش موثر در تولید مناسب فاکتور رشد عصبی نوترکیب (rhngf) محلول و فعال باشد.