comparison of different dna extraction methods for the molecular study of bark beetles (coleoptera: curculionidae, scolytinae)

Bark beetles are one of the most important pests in forests. because of their small size and highly similar morphological characters, molecular approaches may be quite useful for a valid species determination. in this context molecular identification represents an accurate and modern method for species identification. the purity and high quantity of extracted dna have important role in successful amplification of the target fragment of the genome. the aim of this study was comparing different dna extraction methods in order to choose the highest quality and quantity of dna extract for the identification of bark beetles. during the study bark beetles were collected from different parts of the north forests of iran. five different dna extraction methods were performed and evaluated on individual specimen including chelex, phenol chloroform, ctab, salting out and lysis buffer in the laboratory. the quantity and quality of extracted dna were measured by spectrophotometer and gel electrophoresis. the result of dna quantity mean ranged between (23.6-579.7 ng/μl) and the mean quality which was measured by 260/280 ratio (0.9-1.8). the statistical analysis was done by spss software, revealing significant differences between extraction methods. the results suggested that chelex and salting out showed the highest quantity of all used methods.

مقایسۀ روش های مختلف استخراج DNA در مطالعات مولکولی سوسک‌های پوست خوار (Coleoptera: Curculionidae, Scolytinae)

: سوسک‌های پوست خوار یکی از مهم ترین آفات درختان جنگلی به شمار می‌روند. شناسایی سوسک‌های پوست خوار به دلیل اندازه کوچک و شباهت زیاد صفات ریخت‌شناسی نیازمند روش‌های مولکولی به عنوان یکی از کاربردی‌ترین روش‌ها است. مطالعات مولکولی به عنوان روشی دقیق و جدید برای شناسایی گونه‌های حشرات به کار می رود. استخراج DNA با درجه خلوص بالا اهمیت زیادی در مطالعات مولکولی و موفقیت تکثیر مقدار ژن هدف دارد. هدف از انجام این مطالعه مقایسۀ روش‌های مختلف استخراج DNA در سوسک های پوستخوار به منظور انتخاب روشی مناسب با بالاترین کیفیت و کمیت است. نمونه‌برداری سوسک‌های پوست خوار از نقاط مختلف جنگل های شمال ایران انجام شد. 5 روش مختلف استخراج DNA شامل چلکس، فنل کلروفرم، سی تب، نمکی و بافر استخراج بر روی نمونه‌ها در آزمایشگاه انجام و مورد ارزیابی قرار گرفت. کمیت و کیفیت DNA استخراج شده توسط دستگاه اسپکتوفتومتر و ژل الکتروفورز اندازه‌گیری شد. براساس نتایج بدست آمده میانگین کمیت و کیفیت DNA بدست آمده در روش‌های مورد مطالعه به ترتیب 6/23 ndash; 7/579 نانوگرم بر میکرولیتر و بالاترین جذب در 260/280 (8/1 ndash; 9/0) است. نتایج آنالیزهای آماری که توسط نرم افزار SPSS انجام شد تفاوت معنی‌داری را بین روش‌های مختلف استخراج DNA نشان می دهد. نتایج این مطالعه دو روش چلکس و نمکی را به عنوان مناسب‌ترین روش‌ها برای استخراج DNA سوسک‌های پوست خوار معرفی می‌کند.