پروتکل وسترن بلاتینگ و چالش های آن

مقدمه: تشخیص بیان پروتئین در بافت‌ها و سلول‌های عصبی برای آزمایشگاه‌های مدرن علوم اعصاب و آزمایشگاه‌هایی که رویکردهای تشخیصی را انجام می‌دهند ضروری است. بدین منظور، ما یک مقاله مروری جامع در مورد مراحل و چالش‌های وسترن بلات (wb) جمع آوری کردیم. wb نتایج کیفی خوبی برای تعیین محتوای پروتئین هدف در یک نمونه ارائه می‌دهد و به‌ویژه برای تجزیه و تحلیل پروتئین‌های نامحلول مفید است. این فرآیند را می‌توان به‌طور کلی به پنج مرحله تقسیم کرد: 1. استخراج پروتئین، 2. الکتروفورز، 3. انتقال غشا، 4. ایمونودیتکشن، و 5. ظهور و تجزیه و تحلیل. این فرایندها شامل انتقال الگوهای پروتئینی از ژل به غشایی با منافذ ریز است. انتقال پروتئین و به‌دنبال آن ایمونودیتکشن ابزاری عالی برای شناسایی بسیاری از پروتئین‌ها است، به‌ویژه پروتئین‌هایی که فراوانی کمتری دارند. انتقال کارآمد پروتئین‌ها از یک ژل به یک غشاء جامد و ایمونودیتکشن خاص تا حد زیادی به پارامترهای مختلف بستگی دارد. نتیجه‌گیری: برای کاهش چالش‌ها و افزایش آگاهی نسبت به تغییرات جدید در wb، این مقاله مروری، نمایی از روش‌ها، مواد و دستگاه ها در روش wb را فراهم می‌آورد.

Western Blotting Protocol and its Troubleshooting

Introduction: The detection of protein expression in tissues and nerve cells is necessary for the modern neuroscience research laboratory and laboratories making diagnostic approaches. To this point, we collected a comprehensive review article on steps and troubleshooting of Western blotting (WB). WB provides good qualitative results for determining a sample containing a target protein and is particularly useful for analyzing insoluble proteins. This process basically can be divided into five steps: (I) the protein extraction, (II) electrophoresis, (III) membrane transfer, (IV) immunodetection, and (V) visualization and analysis. These processes involve the transfer of protein patterns from gel to microporous membrane. Protein transfer with subsequent immunodetection is a great tool to identify a multitude of proteins, especially those proteins that are of low abundance. The efficient transfer of proteins from a gel to a solid membrane and specific immunodetection depend greatly on different parameters. Conclusion: For reducing the troubleshooting and enhancing awareness of the new developments in WB, this review summaries a representative of methods, reagents, and devices in the WB procedure.