تولید و بررسی آنتی‌بادی پلی‌کلونال موشی علیه انتروتوکسینb استافیلوکوکوس اورئوس

مقدمه: استافیلوکوک اورئوس یک میکروارگانیسم مهم است که با ترشح فاکتورهایی که به‌عنوان سوپر آنتی‌ژن استافیلوکوک شناخته می‌شوند، باعث ایجاد بیماری‌های مختلف در انسان می‌شود. انتروتوکسینb استافیلوکوکوس اورئوس یک آنتی‌ژن باکتریایی است که مسئول مسمومیت غذایی در انسان می‌باشد. برای تولید آنتی‌بادی‌های پلی‌کلونال، آنتی‌ژن مربوطه به یک حیوان حساس تزریق می‌شود و سرم محتوی آنتی‌بادی از آن استخراج می‌شود. سوپر آنتی‌ژن‌های باکتری که فعال‌کننده سلول‌های t قوی هستند می‌توانند بر روی سیستم عصبی مرکزی اثرات حاد یا مزمن داشته باشند. این تحقیق با هدف تولید آنتی‌بادی پلی‌کلونال موشی علیه انتروتوکسین b استافیلوکوکوس اورئوس انجام شده است. مواد وروش‌ها: برای تعیین غلظت پروتئین از روش بردفورد استفاده شد. برای ارزیابی و شناسایی آنتی‌ژن، نمونه‌ها از ژل sdspaeg بر روی غشاء نیترو سلولزی انتقال داده شد و توسط وسترن بلات آنالیز صورت گرفت. ایمن‌سازی موش‌ها در فواصل صفر، دو هفته و چهار هفته به صورت تزریق داخل صفاقی انجام شد. تیتر آنتی‌بادی در آنتی‌سرم جدا شده از حیوان به روش الایزا اندازه‌گیری شد. یافته‌ها: غلظت‌های مختلف پروتئین (320 میکروگرم) با جذب‌های مختلف با فرمول y = 0.0279x + 0.1222 محاسبه شد. در ژل آکریل آمید پروتئین باند اضافه دیده نشد. در تجزیه و تحلیل وسترن بلات باندهای حاصل همگی بیانگر تطابق کامل با نمونه استاندارد بوده و عاری از هر گونه پروتئین‌ ناخواسته بود. نتایج آزمایش الایزا در نوبت دوم در 0/05> p معنی‌دار بود. در آزمایش دابل دیفیوژن بین نمونه شاهد و آنتی‌ژن باند وجود داشت. نتیجه‌گیری:‌ توکسوئید تهیه شده خاصیت کشندگی خود را به طور کامل از دست داده و بنابراین می‌تواند برای ایمن‌سازی و تولید آنتی‌بادی پلی‌کلونال علیه انتروتوکسینb استافیلوکوکوس استفاده شود.

Production and Evaluation of Anti-Mouse Polyclonal Antibody Against Enterotoxin B of Staphylococcus Aurous

Introduction: Staphylococcus aureus is an important microorganism that causes the development of various diseases in humans by secretion of factors that are known as supraantigen of staphylococci. Enterotoxin B of Staphylococcus aureus is a bacterial antigen responsible for food poisoning in humans. To produce the corresponding polyclonal antibody, an antigen is injected into a susceptible animal and the serum of antibody content is extracted. Bacterial superantigens are potent T cell activators that can have acute or chronic effects on the central nervous system. This study aimed to develop a mouse polyclonal antibody against enterotoxin B of Staphylococcus aureus. Materials and Methods: The Bradford method was used to determine protein concentration. For evaluation and identification of the antigen, the samples were transferred onto a nitrocellulose membrane by SDSPAEG gel and analyzed by western blot analysis. Mice immunization was performed at intervals of zero, two, and four weeks using intraperitoneal injection. Antibody titer was measured in antisera isolated from the animal by the ELISA method. Results: Different concentrations of protein (032 mu;g) with different adsorption were calculated with the formula y = 0.0279x + 0.1222. There was no excess protein in the acrylamide gel. In the western blot analysis, the resulting bands represent complete conformance with the standard sample and are free from any unwanted protein. The results of the ELISA test were significant for the secretion of the second time at p <0.05. In the double diffusion test, there was a bond between the control and the antigen. Conclusion: Prepared toxoid has completely lost its fecundity and therefore could be used to immunize and produce polyclonal antibodies against enterotoxin B of Staphylococci.