کشت بافت تخمدان ماهی طلایی (carassius auratus)

در این تحقیق کشت اولیه وکشت های مجدد اول و دوم (ساب کالچر اول و ساب کالچر دوم) بافت تخمدان ماهی طلایی carassius auratus به منظور ایجاد یک مدل آزمایشگاهی از سلول های تخمدان این گونه انجام شد. یک عدد ماهی قرمز به وزن 42 گرم و طول 7 سانتیمتر با پودر گل میخک (0.2g/lit) بی هوش شد و تخمدان آن از بدن خارج و در یک ظرف پتری حاوی 5 میلی لیتر محیط کشت l-15، استرپتومایسین سولفات (200μg/ml )، پنی سیلین پتاسیم جی (200μg/ml) و آمفوتریسین (5μg/ml )b منتقل شد. تخمک ها که در مرحله پیشرفته رسیدگی (مرحله iv) بودند از تخمدان جدا شدند و تخمدان به وسیله یک سرنگ 5 میلی لیتری به تکه های کوچک تر تبدیل شد. تکه های کوچک بافت تخمدان در 5 میلی لیتر محیط کشت 15%، l-15 سرم گوساله جنینی (fbs)، استرپتومایسین سولفات (100μg/ml)، پنی سیلین پتاسیم جی ( 100μg/ml) و آمفوتریسین (2.5μg/ml )b تحت دمای 25 درجه سانتیگراد کشت داده شدند. بعد از گذشت دو هفته و تشکیل مقدار کافی لایه سلولی بر روی کف فلاسک کشت، سلول ها با محلول pbs حاوی آنتی بیوتیک ها شستشو شدند، از کف فلاسک کشت سلول از طریق تیمار با trypsin-edta (0/25 درصد) جدا گردیدند و مجدداً در 5 میلی لیتر محیط کشت 15% ، l-15 سرم گوساله جنینی (fbs)، استرپتومایسین سولفات (100μg/ml)، پنی سیلین پتاسیم جی (100μg/ml) و آمفوتریسین (2.5 μg/ml)b تحت دمای 25 درجه سانتیگراد کشت داده شدند. پس از تشکیل مقدار کافی لایه سلولی بر روی کف فلاسک کشت، در روز پانزدهم همین مراحل برای انجام ساب کالچردوم نیز تکرار شد. سلول های حاصل از کشت اولیه و ساب کالچرهای اول و دوم بافت تخمدان ماهی قرمز همگی سلول های شبه فیبروبلاست (fibroblast-like) بودند.

Ovary culture of Goldfish Carassius auratus

In this study primary culture, subculture1 and subculture2 of ovarian tissue from goldfish was done to develop an in vitro system of ovarian cells in this species. A goldfish weighing 42g and 7 cm in length was anesthetized by Clove powder (0.2 g/lit) and its ovary was removed and put in a petri dish containing 5ml L15 medium, Streptomycin sulphate (200 ug/ml), Penicillin G potassium (Gibco, 200 iu/ml) and Amphotericin B (5 ug/ml). The oocytes which were in advanced maturation stage (IV) were isolated from ovary and the ovary cut into small pieces (explants) by a 5ml syringe. The ovary explants cultivated in 5ml L15 medium supplemented with 15% FBS, Streptomycin sulphate (100 ug/ml), Penicillin G potassium (Gibco, 100 iu/ml) and Amphotericin B (2.5 ug/ml) at 25 deg;C. After two weeks when confluent monolayer formed on the bottom of the flask, the cells were washed with PBS containing antibiotics, dislodged by TrypsinEDTA solution (0.25%) and cultured in 5ml of L15 medium, FBS (15%), antibiotics at 25 deg;C (first subculture). After confluent monolayer formation, on the sixteenth day similar procedure was followed for the second subculture.The emerging cells from explants and two subcultures exhibited fibroblastlike cells.