شناسایی، کلونینگ و توالی‌یابی ژن پیسیدین ماهی شانک سر طلایی (sparus aurata) در باکتری escherichia coli

پیسیدین در از بین بردن میکروارگانیسم ها اعم از باکتری، قارچ، ویروس، انگل طیف گسترده ای دارد و دارای فعالیت قوی ضدتوموری است و در افزایش ایمنی ذاتی نقش دارد و لذا در برابر باکتری ها مقاومت ایجاد نمی کند؛ بنابراین از اهمیت بالایی در آبزی پروری برخوردار است. در این پژوهش کلونینگ ژن پیسیدین ماهی شانک سر طلایی (sparusaurata) در وکتور ptz57r/t صورت گرفت. محصول اتصال به سلول های مستعد باکتری e. coli سویه dh5 α منتقل شدند. از تک کلنی های مشاهده شده در پلیت آمپی سیلین، استخراج پلاسمید انجام گرفت. تاءیید صحت تک کلنی های رشد یافته در این پژوهش، با روش های pcr مستقیم و تعیین توالی انجام گردید. قطعه تکثیر شده cdna ژن پیسیدین ماهی شانک سرطلایی متشکل از 310 نوکلئوتید و 57 آمینواسید است. نتایج حاصل از این پژوهش نشان داد که ژن پیسیدین در وکتور ptz57r/t با موفقیت کلون گردیده است. مقایسه توالی نوکلئوتیدی ژن پیسیدین در این پژوهش شباهت بالایی را با پیسیدین 5 گونه morone chrysops نشان داد. مقایسه توالی آمینواسیدی سیگنال پپتید پیسیدین کاملا مشابه با dicentracin-like همین گونه ثبت شده در بانک ژنی بوده و توالی پپتید بالغ پیسیدین تنها در سه آمینواسید با pleorocidinlike گونه poesila farmosa و dicentracin-like گونه sphaeramia orbicularis شباهت دارد. این پژوهش می تواند گامی برای مطالعات بعدی پپتید پیسیدین باشد.

Identification,cloning and sequencing of piscidin gene from Gilthead seabream (Sparus aurata) in E. coli

Piscidin has a wide range in killing microorganisms including bacteria, fungi, viruses, parasites and has strong antitumor activity and plays a role in increasing innate immunity and also does not provide resistance against bacteria; Therefore, it is of great importance in aquaculture. In this study, piscidin gene of Sparus aurata in vector pTZ57R / T was cloned. In this research, ligation product was transferred to component cell of E. coli DH5 α strain. Plasmid extraction was performed from single colonies observed in ampicillin plate. Confirmation of the accuracy of single colonies grown in this research was performed by direct PCR and sequencing. The amplified cDNA fragment of the gilthead seabream piscidin gene consists of 310 nucleotides and 57 amino acids. The results of this research show that piscidin gene has been successfully cloned in pTZ57R / T vector. Comparison of nucleotide sequence of piscidin gene in this study showed high similarity with piscidin 5 of Morone chrysops. The comparison of the amino acid sequence of signal peptide piscidin is quite similar to Dicentracin-like of that species registered in the genebank, and mature peptide piscidin sequence is similar in only three amino acids to Pleorocidinlike of Poesila farmosa and Dicentracin-like of Sphaeramia orbicularis. This study could be a step towards further studies of piscidin peptide.