شناسایی ژن‌های مولد بیوفیلم در سویه‌های کاندیدا آﻟﺒیکنس و ارزیابی نانوذره آهن بر بیان ژن Als به روش Real Timepcr

هدف: تقریباً سه ‌چهارم زنان در معرض واژینیت کاندیدیایی هستند. از جمله عوامل بیماری‌زا می ‌توان به قدرت اتصال کاندیدا به بافت میزبان از طریق عواملی مانند مولکول ‌های چسبنده و پروتئین‌ هایی که این اتصال را تسریع می‌کنند اشاره نمود. هدف از انجام مطالعه حاضر؛ بررسی فراوانی ژن‌ های مولد بیوفیلم در سویه‌ های کاندیدا آﻟﺒﯿﮑﻨﺲ جداشده از واژینوز (vaginosis) و بررسی مقایسه‌ ای بیان ژن als در سویه‌ های تحت تیمار (treatment) با نانوذره آهن در شرایط آزمایشگاهی به روش real timepcr می ‌باشد. روش­ بررسی: در این مطالعه توصیفی مقطعی، تعداد 100 نمونه کاندیدا که از نمونه ‌های واژینوز زنان به ‌دست ‌آمده بود مورد بررسی قرار گرفت. پس از شناسایی سویه ‌های کاندیدا آلبیکنس با استفاده از تست‌ های بیوشیمیایی و میکروبیولوژیکی استاندارد، استخراج dna ژنوم با استفاده از کیت شرکت سیناژن انجام گردید. به‌ منظور ردیابی ژن ‌های als، hwp1 و hyr آزمون multiplexpcr انجام گردید. همچنین به‌ منظور بررسی اثر نانوذره آهن ‌بر بیان ژن als، rna ­ سویه های حاوی این ژن با استفاده از کیت cinnapure استخراج گردید و پس از تبدیل به cdna، آزمون realtime pcr انجام شد. یافته­ ها:  نتایج آنالیز مولکولی نشان داد که از 60 ایزوله کاندیدا آلبیکنس 34 ایزوله (65/66%) واجد ژن hwp ، 46 ایزوله (76/66 %) واجد ژن als و 33 ایزوله (55%) واجد ژن hyr بودند. نتایج مربوط به منحنی ذوب ژن als در سویه‌ های بالینی کاندیدا آلبیکنس و تیمار شده با نانو ذره آهن نشان داد که peak اصلی برای این ژن در دمای 85/34 درجه سلسیوس رخ می ‌دهد. نتیجه ‌گیری: بیان ژن als در ایزوله‌ های تحت مطالعه تیمار شده نسبت به ایزوله‌ های تیمار نشده پایین‌تر بدست آمد که نشان دهنده نقش مثبت تیمار نانوذره آهن در کاهش بیان ژنals  در ایزوله ‌ها می باشد.

Identification of Biofilm Formation Genes in Candida albicans and Evaluation of Iron Nanoparticles on the Expression of als gene by Real TimePCR

Purpose: Approximately threefourths of women experience an episode of vaginal candidiasis. One of the virulence factors, is the ability of attachment of C. albicans to the host tissue through factors such as sticky molecules and proteins that accelerate this connection. The aim of this study was to investigate the frequency of biofilm formation genes in C. albicans strains isolated from vaginosis and to compare the expression of als gene in strains treated with iron nanoparticles in the in vitro using real time PCR. Methods: In this descriptive crosssectional study conducted in Shariati Hospital during a 6months period, 100 isolates Candidafrom vaginal specimens were evaluated. After identification of C. albicans strains using standard biochemical and microbiological tests, genomic DNA extraction was performed using the CinnaGen Company Kit. MultiplexPCR assays were performed to detect als, hwp1 and hyr genes. Also, to investigate the effect of iron nanoparticle on expression of als gene, RNA, all isolates containing this gene were extracted using Cinnapure kit. After cDNA synthesis, real time PCR test was performed. Results: Molecular analysis results showed that from the total of 60 isolates of C. albicans, 34 isolates (56.66%) had the hwp gene, 46 isolates (76.66%) had Als gene and 33 isolates (55%) had Hyr gene. The results of the asl melting curve in clinical strains of C. albicans and treated with iron nanoparticles showed that the main peak for this gene occurs at 85.34 ° C. Conclusions: Als expression in the treated isolates was lower than untreated, which indicates the positive role of the treatment in reducing Als gene expression in these isolates.