جداسازی و ارزیابی فعالیت سیتوتوکسیک و آنتی‌اکسیدانی گونه‌های اکتینوباکتری جداشده از دو گونه خیار دریایی (holothuria scabra و holothuria leucospilota) خلیج‌فارس

جداسازی انتخابی باکتری های زیست فعال از ارگانیسم های دریایی نقش تعیین کننده ای در میزان موفقیت مطالعات غربالگری دارد. هدف اصلی پژوهش حاضر دستیابی به فرایندی برای جداسازی انتخابی جدایه های اکتینوباکتری مولد متابولیت های آنتی اکسیدان و سیتوتوکسیک از 2 گونه خیار دریایی شامل holothuria scabra و holothuria leucospilota بود. نمونه برداری از جزیره لارک واقع در خلیج‌فارس با استفاده از غواصی از اعماق 10 تا 15 متر در اسفندماه 1394 انجام شد. برای جداسازی انتخابی از تیمارهای خشک کردن، حرارت دادن، پرتو فرابنفش، امواج فراصوت، انجماد و تیمار با فنول استفاده شد. بدین منظور از 3 محیط کشت مختلف استفاده شد. سنجش فعالیت آنتی اکسیدانی متابولیت های استخراج‌شده با استفاده از روش سنجش مهار رادیکال‌های آزاد dpph و فعالیت سیتوتوکسیک با استفاده از آزﻣﻮن سمیت ﻣﯿﮕﻮی آب‌شور به‌صورت مایکرودایلوشن انجام شد. حدود 49/58 درصد از کل جدایه های اکتینوباکتری از خیار دریایی h. leucospilota جداسازی شدند. محیط کشت نشاسته کازئین نیترات آگار و تیمار حرارت دادن با جداسازی به ترتیب 22 و 21 جدایه اکتینوباکتری، بیشترین کارایی را در انتخابی نمودن فرایند جداسازی نشان دادند. 03/37 درصد از عصاره متابولیت های استخراج‌شده از جدایه های اکتینوباکتری توانایی مهار رادیکال‌های آزاد dpph را در محدوده ic50 از 1/136 تا 5/641 میکروگرم بر میلی‌لیتر نشان دادند. درحالی‌که 33/33 درصد از متابولیت های استخراج‌شده اثر سیتوتوکسیک خود را در محدوده lc50 12/118 تا 15/653 میکروگرم بر میلی‌لیتر بر سلول های آرتمیا اعمال نمودند. این پژوهش ضمن ارائه یک فرایند جداسازی انتخابی برای اکتینوباکتریها، حضور و پتانسیل بالای این باکتری‌ها را به‌عنوان بخشی از میکروبیوتای فعال مرتبط با دو گونه خیار دریایی نشان داد. جدایه های بدست آمده می‌توانند منبع بالقوه ای برای یافتن ترکیبات طبیعی دارویی باشند.

Isolation and Evaluation of Cytotoxic and Antioxidant activity of the isolated Actinobacteria from the two Species of Persian Gulf Sea Cucumber (Holothuria scabra and Holothuria leucospilota)

Marine actinobacteria are the prolific sources of marine natural products. The aims of the present study were to propose a process for selective isolation of actinobacteria from the two species of sea cucumbers Holothuria scabra and Holothuria leucospilota and also to find isolates that produce antioxidant and cytotoxic metabolites. We collected 2 sea cucumbers species from the Larak Island, Persian Gulf using scuba diving. The selective isolation process was performed by 3 culture media and 7 physical and chemical treatments. Antioxidant activity of extracted metabolites were evaluated using DPPH radical scavenging activity. Evaluation of cytotoxicity of the extracted metabolites was carry out using brineshrimp microwell cytotoxicity assay. Out of 53 actinobacterial isolates, 58.49% was isolated from sea cucumber H. leucospilota. Starch casein nitrate agar medium and heat treatment isolated 22 and 21 actinobacterial isolates of and exhibited maximum efficiency in selective isolation of actinobacteria. Approximately, 37.03 % of the extracted metabolites scavenged DPPH radicals at IC50 ranges from 136.1 to 641.5 micro;g/ml. While, 33.33 % of the extracted metabolites showed cytotoxic activity against artemia cells at LC50 range from 118.12 to 653.15 micro;g/ml. These results represented a selective isolation process for sea cucumber associatedactinobacteria and also could provide an evidence that confirms the active association of the actinobacteria with the two species of the Persian Gulf sea cucumber species. The isolated strains could be a potential source for finding pharmaceutical natural products.