بررسی سینتیک آنزیمی پراکسیداز در ریشه گیاه کنگر ( Gundelia Tournefortii)

خصوصیات سینتیکی آنزیم پراکسیداز ریشه کنگر از نظر دمایی، ph و اثر بازدارنده ها بررسی شد. بیشترین فعالیت پراکسیدازی کنگر در  ph 5/5 تا 6/5 بر حسب نوع سوبسترا متغیر می باشد. فعالیت در غلظت ثابت  h2o2 با افزایش غلظت هر کدام از سوبستراهای گایاکل، کتکول و پیروگالل افزایش یافته، طوری که در غلظت 22 میلی مولار گایاکل به بیشینه یعنی unit/mg. protein 4/2 می رسد. در غلظت ثابت گایاکل و غلظت‏های متغیر h2o2 بیشینه ی فعالیت unit/mg protein 2 به دست آمد و km آن 4 میلی‏مولار تعیین شد. در40 میلی‏مولار فعالیت آن به 35% بیشینه می رسد. بازدهی کاتالیتیکی پراکسیداز در غلظت ثابت گایاکل  و در غلظت ثابت پراکسید هیدروژن به ترتیب mm1 0/5 و unit/mg protein 0/5 محاسبه گردید، در حالیکه بازدهی کاتالیتیک پراکسیداز ریشه در حضور کتکول و پیروگالل به ترتیب 0/33 و 0/66 محاسبه گردید. پایداری آنزیم و بیشترین فعالیت پراکسیدازی در 40 درجه سانتی گراد حاصل شد و در گستره ی دمایی 50 درجه و 60 درجه فعالیت آنزیمی با گذشت زمان کاهش یافت. سدیم سیانید در غلظت‏های کم اثر مهارکنندگی داشته و در غلظت‏های بالا فعالیت پراکسیداز را به صفر می رساند در حالی که سدیم آزید برای مهار پراکسیداز به غلظت‏های بالاتری نیاز دارد. ic50 در حضور سدیم سیانید 0/008 میلی‏مولار و در حضور سدیم آزید 0/4 میلی‏مولار می‏باشد، یعنی ic50 در حضور سدیم آزید 312 برابر ic50 در حضور سدیم سیانید است. سیانید مهارکننده رقابتی پراکسیداز ریشه کنگر در حضور کتکول و پیروگالل و مهارکننده غیر رقابتی آنزیم در حضور گایاکل است.

Kinetic investigations of peroxidase in roots of Gundelia Tournefortii

Kinetic properties of root of peroxidase of Gundelia tournefortii investigated at different pH, temperature and different inhibitors. Maximum activity of peroxidase achieved at pH 5.56 in according to type of substrate. Activity of peroxidase increased at constant concentration of H2O2 and different concentration of guaiacol, catechol and pyrogallol. The maximum activity in presence of 22mM of guaiacol was earned 2.4 Unit/mg.protein. At constant concentration of guaiacol and different concentration of H2O2, Vmax and Km were 2 Unit/mg.protein and 4 mM respectively. Activity decreased at high concentration of H2O2 so reached to 35% of Vmax at 40 mM. Catalytic efficiency of peroxidase in presence of constant concentrations of guaiacol and H2O2 calculated 0.5 and 0.5 Unit/mg protein mM1 respectively. Stability of enzyme and maximum of activity was earned at 40 0C. Sodium cyanid and sodium azide showed inhibitory effect on activity with IC50 of 0.008 and 0.4 mM respectively. These results of inhibitors showed that inhibitory effect of Azid is 312 times of inhibitory effect of cyanide. Cyanid is competitive inhibitor of peroxidase in presence of catechol and pyrogallol and noncompetitive inhibitor of enzyme in presence of guaiacol, and Azide is noncompetitive inhibitor of peroxidase of root in gundelia tournefortii in presence of catechol and pyrogallol and uncompetitive inhibitor of enzyme in presence of guaiacol and kojic acid is uncompetitive inhibitor of peroxidase in presence of guaiacol and pyrogallol.