بررسی تاثیر ‏a366‎‏ (مهارکننده آنزیم ‏g9a‏) ‏بر پتانسیل استئوژنیک سلول‌های بنیادی ‏مزانشیمی مغز استخوان رت

سلول‌های بنیادی مزانشیمی (mscs)، سلول‌های بنیادی چندتوانی هستند که پتانسیل تمایز به دودمان‌های بافت همبند را داشته و ویژگی‌های منحصربه‌فردی از قبیل تعدیل سیستم ایمنی و ترشح فاکتورهای رشد را دارند. آنزیم هیستون متیل ترانسفراز g9a یکی از فاکتورهای دخیل در کنترل رفتار و ویژگی بسیاری از سلول‌های بنیادی می‌باشد. از این‌رو، بررسی نقش g9a در کنترل رفتار و پتانسیل mscs دارای اهمیت می‌باشد. mscs از مغز استخوان رت استخراج شده و در محیط آزمایشگاهی کشت شدند. سپس با استفاده از فلوسایتومتری بیان مارکرهای cd73 و cd90 و عدم بیان مارکر cd45 در سلول‌های استخراج‎شده بررسی شد. سپس mscs مشتق از مغز استخوان (bm-mscs) در پاساژ سوم با استفاده از غلظت‌های مختلف a366 (یک مهارکننده اختصاصی آنزیم g9a) تیمار شدند. میزان تمایز به استخوانِ bm-mscs تیمارشده با a366، با استفاده از بررسی فعالیت آلکالین فسفاتاز و رنگ‎‌آمیزی الیزارین رد و نیز بیان ژن‌های استخوانی تعیین شد. bm-mscs به‌صورت چسبنده رشد کرده و مورفولوژی فیبروبلاستی/ستاره‌ای داشتند. همچنین بیش از 85 درصد سلول‌ها برای دو مارکر cd73 و cd90 مثبت بوده و مارکر cd45 را بیان نمی‌کردند. همچنین تیمار bm-mscs با غلظت 1، 3 و 5 میکرومولار از a366 موجب کاهش پتانسیل تمایز سلول‌ها به سمت سلول‌های استخوانی شد. a366 به‌عنوان یکی از تنظیم‌کنندگان اپی‌ژنتیکی، پتانسیل تمایز به استخوان را کاهش می‌دهد. استفاده از این تنظیم‌کننده‌ها برای درمان سرطان، ممکن است ترمیم و هومئوستازی بافتی را تحت تاثیر قرار دهد.

Study of the Effect of A366 (A G9a ‎Methyltransferase Inhibitor) on ‎Osteogenic Potential of Rat Bone ‎Marrow-Derived Mesenchymal ‎Stem Cells

Mesenchymal stem cells (MSCs) are multipotent stem cells that have potential to differentiate into connective tissue lineages. They also have special properties such as immunomodulation and secretion of growth factors. Histone methyltransferase G9a is one of the factors that control stem cells behaviors and features. Hence, it is important to study the role of G9a in MSCs biological behaviors and potentials. MSCs were isolated from rat bone marrow and cultured in vitro. Then, the expression of positive markers (CD90 and CD 73) and negative markers (CD45) were analyzed using flowcytometry. BM-MSCs were treated with different doses of A366, and then were differentiated to osteocyte. Osteogenesis were analyzed using oil red staining and real timePCR.  BM-MSCs were expanded as adherent cells with fibroblastic morphology. More than 85% of cells were positive for CD73 and CD90, and negative for CD45. The treatment of BM-MSCs with A366 reduced osteogenesis as evaluated by oil red staining and gene expression analysis. A366, as an epigenetic regulator decreases the osteogenic potential of BM-MSCs. Use of these regulators for cancer therapy, might influence tissue regeneration and homeostasis.