شناسایی یک پروتئین مهارکننده فعالیت آمیلازی در بذر گندم

پروتئینهای ذخیرهای در دانه گیاهان در زمینه های متنوعی مانند تغذیه ، شیمی پروتئین، داروسازی، بیوشیمی گیاهی و پزشکی مورد مطالعه قرار می‌گیرند. توانایی این ترکیبات برای ایجاد مشکلات تغذیه ای، اثرات سمی و دارویی هنگامی‌که مصرف می شوند باعث گردیده که در زمینه پراکندگی آنها در گیاهان مطالعات متعددی انجام شود. در این پژوهش پروتئینهای بذر گندم واریته زرین استخراج و خالص سازی پروتئین روش رسوب جزءبه‌جزء با آمونیوم سولفات، دیالیز و کروماتوگرافی تعویض یونی انجام گردید. بعد از خالصسازی با روش کروماتوگرافی سریع پروتئین با فاز مایع، ویژگیهای الکتروفوزی این پروتئین با روش الکتروفورز ژل سدیم دو دسیل سولفات پلی آکریل آمید بررسی شد. مهارکنندگی پروتئین مورد نظر در برابر فعالیت آلفاآمیلاز استاندارد (با منشا باکتریایی) و بزاق انسانی با استفاده از روش برنفلد مورد سنجش قرار گرفت. دیاگرام خالص سازی و جمع آوری پروتئین مورد نظر را نشان داد. الگوی الکتروفورزی این پروتئین با حرکت نسبی 59/0 و 60/0 تاییدی بر فرایند خالص‌سازی پروتئین میباشد. فعالیت آلفاآمیلاز استاندارد (با منشا باکتریایی) به میزان %97/89 و همچنین فعالیت هیدرولیتیک بزاق انسانی توسط این پروتئین به میزان%07/97 کاهش نشان داد. جداسازی، خالص سازی و مهارکنندگی آلفا آمیلازی پروتئین استخراج‌شده از بذر گندم زرین در این پژوهش تایید گردید. مهار آلفاآمیلاز باکتریایی توسط این پروتئین با استفاده از روشهای نوین و ابزارهای بیوتکنولوژی و مهندسی ژنتیک درکنترل طبیعی بیماریها و آفات گیاهی میتواند مورد توجه محققین کشاورزی قرارگیرد. این مهارکننده آلفاآمیلاز همچنین میتواند در درمان دیابت و نارساییهای گوارشی و اصلاح رژیمهای غذایی به منظورکاهش وزن کاربرد داشته باشد.

identification of a protein that inhibit amylase activity in seed of wheat

storage proteins which found in seeds of many plants are studied in various fields such as human and animal nutrition, chemistry of protein, pharmacology, plant biochemistry and medicinal plants. the ability of these compounds to cause nutritional problems and toxic effects when used as foods has led to several studies on their dispersion in plants. in this research, seed proteins of wheat (zarrin variety) have been extracted. the protein of interest was purified by ammonium sulfate precipitation method; dialysis and ion exchange chromatography. after purification by fast protein liquid chromatography (fplc), electrophoretic properties of this protein were investigated by sodium dodecyl polyacrylamide gel electrophoresis )sds page( method. inhibitory activity of this protein against bacterial alpha amylase and human saliva were measured using the bernfeld method. fplc diagram illustrates the purification and collection of the desired protein. the electrophoretic pattern of this protein with relative mobility of 0.60 and 0.59 confirmed the purification process. hydrolytic activity of bacterial and human saliva alpha amylase decreased by this protein 89.97% and 97.07% respectively. in general the isolation, purification and alpha amylase inhibition property of this protein which extracted from wheat seed were confirmed in this study. inhibition of bacterial alpha amylase by this protein can be considered by agricultural researchers in biological control of parasites and pests. this alpha amylase inhibitor can also be used to treat diabetes, digestive deficiencies and modify dietary regimens to reduce weight.