همسانه سازی و بررسی بیان ژن متالوتیونین Smta در باکتری اشریشیا کلی به منظور جذب فلزات سنگین

یکی از راه های جذب فلزات سنگین علاوه بر روش های شیمیایی و فیزیکی، استفاده از فرآورده‌های زیستی می باشد. یکی از این فرآورده ها، پروتئین های جاذب فلزات سنگین مانند متالوتیونین می باشد.هدف: هدف از این مطالعه، همسانه‌سازی ژن متالوتیونین smta از سیانوباکتری سینکوکوس ایلانگاتوس سویه pcc7942 ، بیان و بررسی جذب فلز توسط آن می‌باشد.روش‌ها: ژن smta در ناقل همسانه‌سازیt/a ، همسانه‌سازی و در باکتری e.coli (dh5α)تراریخت شد. صحت تراریختی با colonypcr بررسی شد. سپس ژن مورد نظر به داخل ناقل بیانی pet15b زیرهمسانه سازی و در باکتری e.coli (bl21) تراریخت گردید. صحت تراریختی با بررسی الگوی هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید گردید. القای بیان ژن توسط iptg انجام شد و بیان پروتئین توسط تریس‌تریسین sdspageو وسترن بلات بررسی شد. بررسی جذب یون کادمیم توسط پروتئین توسط دستگاه جذب اتمی صورت گرفت.نتایج: نتایج توالی‌یابی، صحت تراریختی را تائید کرد. بیان پروتئین تولید شده با روش های sdspageو وسترن بلات تایید گردید. بررسی جذب فلز نشان داد که یک میلی گرم پروتئین smta می تواند به میزان 28 نانو مول یون کادمیم را جذب نماید.

Cloning and expression of smtA metallothionein in Escherichia coli for heavy metal absorption

One way to absorb heavy metals in addition to chemical methods is the use of biological elements. One of the metal adsorption proteins is metallothionein.Goal: The purpose of this study is gene cloning and expression of Synechococcus PCC7942 metallothionein smtA and protein production and analysis of metal uptake by the protein.Methods: The gene smtA was cloned into the T / A cloning vector and then were transferred into the E.coli (DH5α). ColonyPCR evaluates the accuracy of the transformation and sequence detection was carried out. The gene was subcoloned into the expression vector pET15b and transferred into the E.coli (BL21). Gene expression was induced by IPTG and proteins were analyzed by TrisTrisin SDSPAGE and Western blotting. Metal uptake of protein was measured by atomic absorption.Results: Sequencing, confirmed the accuracy of the transformation. SDSPAGE and Western blot analysis confirmed protein expression. Metal absorption showed that one milligram of protein adsorbs 28 nmol of cadmium ion.