بررسی اثر انجماد شیشه ای بر میزان بیان نشانگرهای اختصاصی پرتوانی، oct4 و nanog، در بلاستوسیستهای موش سوری

مقدمه: از زمان اولین انجماد شیشه‌ای رویان موش در سال 1985، تلاش‌ها‌ی قابل توجهی برای توسعه و بهبود این تکنیک صورت گرفته است اما همچنان انجماد با اعمال آسیب‌های جدی بیوشیمیایی و کروموزومی بر روی رویان می‌تواند باعث تغییراتی در الگوی بیان ژن‌های دخیل در تکوین و عملکرد، کاهش لانه‌گزینی و نهایتا مرگ رویان گردد. هدف از این مطالعه بررسی تاثیرات انجماد شیشه‌ای بر زنده‌مانی و رشد و بررسی بیان ژن‌های تخصصی پرتوانی موثر در تکوین رویان از جمله ژن‌های oct4 و nanog در بلاستوسیست‌های منجمد ذوب شده‌ی موش بود. روش کار: پس از تحریک تخمک‌گذاری موش‌های ماده و استحصال بلاستوسیست، فرآیند انجماد با حضور دی‌متیل سولفوکسید 15%، اتیلن‌گلیکول 15% و ساکارز 5/0 مولار به عنوان مواد سرما‌محافظ در محیط‌های انجمادی انجام شد و بلاستوسیست‌ها با قرار‌گیری روی cryotop، به درون ازت مایع منتقل گشتند. فرآیند ذوب نیز با شست‌و‌شوی رویان‌ها در محیط ذوب حاوی ساکارز 1 مولار صورت پذیرفت. نهایتا میزان زنده‌مانی، خروج بلاستوسیست‌ها از زونا و نیز بیان ژن‌های oct4 و nanog به روش real time pcr در بلاستوسیست‌های منجمد ذوب شده و شاهد ارزیابی شد. نتایج: نرخ زنده‌مانی و خروج بلاستوسیست‌ها از زونا در تیمار انجماد نسبت به بلاستوسیست‌های منجمد نشده بطور معنی‌داری کاهش یافتند (5.81±94.43% در مقابل 100% برای زنده‌مانی و 11.76±57.78% در مقابل5.80± 86.88% برای خروج بلاستوسیست از زونا). همچنین بیان ژن‌های nanog و oct4 افزایش یافت. نتیجه‌گیری: با توجه به یافته‌های این آزمایش می‌توان گفت که انجماد شیشه‌ای بلاستوسیست موش سوری در مرحله‌ی بلاستوسیست می‌تواند باعث تغییر بیان ژن و کیفیت رویان گردد.

The effect of vitrification on pluripotency specific genes, Oct4 and Nanog in mouse blastocysts

Introduction: From the first vitrification of mouse embryos in 1985, considerable efforts have been made to develop and improve cryopreservation techniques, but still biochemical and fetal chromosomal abnormalities caused by vitrification can cause changes in the pattern of genes expression involved in embryonic development and function, reduced implantation and fetal death. The purpose of this study was to investigate the effects of vitrification on survival and the expression of pluripotency specific genes like Oct4 and Nanog in the vitrifiedwarmed mouse blastocysts. Methods & Materials: Harvested blastocysts from superovulated female mice were vitrified in the presence of dimethyl sulfoxide 15%, ethylene glycol 15% and sucrose 0.5 M as cryoprotectants and vitrified in liquid nitrogen after loading on Cryotop. Thawing process was performed by immersing the blastocysts in thawing solution prepared using sucrose 1 M. Survival and hatching rates were evaluated and also the Oct4 and Nanog genes expression in vitrified thawed and fresh blastocysts (control group) were assessed by real timePCR method. Results: Survival and hatching rates decreased significantly in vitrified blastocysts compared with control group (94.43± 5.81% vs. 100% for survival and 57.78± 11.76% vs. 86.88± 5.80% for hatching). Also increased expression of Nanog and Oct4 genes were observed in vitrified warmed blastocysts. Conclusion: Considering the results of this study, it can be said that vitrification of mouse embryo at the blastocyst stage can change gene expression and quality of the embryo.