>
Fa   |   Ar   |   En
   جداسازی، همسانه سازی و بیان ژن زیرواحد آلفا فیکوسیانین در سیستم بیانی اشرشیاکلی  
   
نویسنده شجاع زهرا ,رجبی معماری حمید ,رعایایی اردکانی محمد
منبع پژوهشهاي سلولي و ملكولي - 1394 - دوره : 28 - شماره : 3 - صفحه:352 -359
چکیده    فیکوسیانین رنگدانه آبی رنگی است که در دو گروه از جلبک ها و سیانوباکترها ازجمله spirulina وجود دارد. این رنگدانه دارای فعالیت های متنوع زیستی است و کاربردهای گوناگونی در صنعت غذایی، آرایشی و دارویی دارد. پیشرفت های زیادی جهت تولید فیکوسیانین در مقیاس بالا انجام شده است، اما اغلب روش ها مشکل و با هزینه های بالایی قابل انجام هستند؛ درصورتی که همسانه سازی و بیان فیکوسیانین به صورت نوترکیب روشی ارزان است و خالص سازی آن آسان تر انجام می پذیرد. از این رو هدف از این تحقیق، جداسازی و همسانه سازی ژن زیرواحد آلفا فیکوسیانین در ناقل بیانی و تولید این پروتئین نوترکیب در باکتری اشرشیاکلی بود تا زمینه تولید فیکوسیانین به صورت صنعتی فراهم گردد. در این پژوهش ژنوم سیانوباکتر spirulina platensisاستخراج شد و به عنوان الگو در pcr مورد استفاده قرارگرفت. ژن زیرواحدآلفا فیکوسیانین تکثیریافته با آغازگرهای طراحی شده، در ناقل بیانی +pet-43.1a با استفاده از آنزیم های برشی ndeiوnoti کلون گردید. همسانه سازی ژن زیرواحد آلفا در ناقل بیانی با استفاده از colony pcr، هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید شد. بیان ژن با استفاده از آنالیز sdspage 12/5٪ تا 8ساعت پس از القا با iptg مورد بررسی قرارگرفت. در بررسی sdspage، بیان قوی ژن زیرواحدآلفا فیکوسیانین در سیستم بیانی اشرشیاکلی تائید شد. بیان بالای ژن زیرواحدآلفا فیکوسیانین نشان داد که باکتری اشرشیاکلی می تواند به عنوان میزبان مناسب، جهت تولید فیکوسیانین نوترکیب مورد استفاده قرارگیرد. همچنین این تحقیق زمینه تولید فیکوسیانین نوترکیب در آینده را با صرف هزینه های پایین تر فراهم آورد.
کلیدواژه همسانه سازی، بیان، ژن زیرواحد آلفا فیکوسیانین، اسپیرولینا پلتنسیس، + Pet-43.1a
آدرس دانشگاه آزاد اسلامی واحد جهرم, ایران, دانشگاه شهید چمران اهواز, ایران, دانشگاه شهید چمران اهواز, ایران
پست الکترونیکی roayaei_m@yahoo.com
 
   Isolation and Cloning of Phycocyanin Alpha Subunit Gene and its Production in E.coli Expression System  
   
Authors
Abstract    Phycocyanin is a blue pigment in two eukaryote algal genera and in cyanobacteria as Spirulina. This pigment has various biology activities and are utilised in a number of applications in foods, cosmetics and pharmaceuticals. A lot advantage of phycocyanin studied by many researchers but the scaleup of these methods is difficult and expensive while production of recombinant phycocyanin is more convenience and inexpensive to scale up protein desire. The purpose of this study was to isolation and cloning of phycocyanin alpha subunit gene in expression vector and production of recombinant protein in E.coli to provide industrial production of phycocyanin. The genomic DNA of Spirulina platensis was prepared and used for PCR as template. phycocyanin alpha subunit gene amplified by designed specialize primers was cloned in a pET43.1a+ expression vector, under the control of T7 promoter using NdeI and NotI restriction enzymes. The cloning of phycocyanin alpha subunit gene is confirmed by colony PCR, digestion and DNA sequencing. The constructs were transformed into E.coli strain BL21 (DE3). Expression of phycocyanin alpha subunit gene was examined by 12.5 % SDSPAGE analysis at 8 hrs after induction by IPTG. The SDSPAGE analysis showed that alpha subunit phycocyanin was produced in E.coli expression system. Our study provided the production of recombinant phycocyanin. Also overexpression of the synthetic alpha subunit phycocyanin in a bacterial system (E.coli BL21) showed that E.coli can be used to produce this desire protein in large quantity.
Keywords
 
 

Copyright 2023
Islamic World Science Citation Center
All Rights Reserved