انتقال ژن لوسیفراز حشره شب‌تاب گونه ایرانی Lampyris turkestanicus با نشر نور قرمز به گیاه بنفشه آفریقایی (Saintpaulia ionantha)

آنزیم لوسیفراز حشره شب‌تاب (luc) یکی از مهم‌ترین آنزیمهای صنعتی است که به طور وسیع در زمینه‌های مختلف پزشکی، بیوتکنولوژی و بیولوژی سلولی و مولکولی کاربرد دارد. این آنزیم، به دلیل داشتن خصوصیاتی هم چون حساسیت بالا، تکرارپذیر بودن و قابلیت اندازه‌گیری کمی آن، کاندیدای بسیار مناسبی در زمینه تصویربرداریهای بیولومینسانس در شرایط طبیعی و در سیستمهای گزارشگر می‌باشد. تحقیق حاضر جهت ساب‌کلونینگ و انتقال ژن لوسیفراز حشره شب‌تاب گونه ایرانی l. turkestanicus با نشر نور قرمز در گیاه بنفشه آفریقایی (saintpaulia ionantha) انجام گرفت. بدین منظور ژن لوسیفراز (luc) با استفاده از واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (pcr) با آغازگرهای اختصاصی از ناقل pet 28a جداسازی و در ناقل بیانی pcambia1304 اتصال گردید. ناقل نوترکیب جدید (pcamluc) با استفاده از بررسیهای colony pcr،pcr ، هضم آنزیمی، توالی‌یابی و هم ردیف‌سازی آن در بانک اطلاعاتی (genbank)، مورد تایید قرار گرفت. ژن هدف به کمک آگروباکتریوم سویه lba4404 به گیاه بنفشه آفریقایی منتقل گردید و گیاهان تراریخت بر روی محیطهای کشت انتخابی حاوی آنتی‌بیوتیکهای هیگرومایسین و سفوتاکسیم باززا شدند. آنالیزهای pcr و rt-pcr حضور ژن در ژنوم گیاه و نسخه‌برداری از آن را تایید کرد. همچنین نتایج حاصل از سنجش لومینومتری، فعالیت آنزیم لوسیفراز را در بافتهای برگی بعضی از گیاهان نشان داد. در این سنجش حداکثر نور نشر شده rlu/sec 20000 بود در حالی که در گیاهان شاهد نشر نوری سنجیده نشد.