تاثیر فاکتور‌های القایی بر توان رشد، کلون‌زایی و الگوی ژنتیکی سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی ماهی آزاد دریای خزر در شرایط آزمایشگاهی

کشت سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی در شرایط آزمایشگاهی، منابع با ارزشی را برای انجام مطالعات پایه ای و کاربردی در زمینه بیوتکنولوژی تولیدمثل فراهم می کند. لذا،این مطالعه با هدف بررسی اثر فاکتور‌های مختلف رشد بر میزان تکثیر، کلون‌زایی و بیان برخی از ژن‌های اختصاصی‌ سلول‌های اسپرماتوگونی ماهی آزاد دریای خزر در شرایط آزمایشگاهی طراحی شده است. سلول‌های اسپرماتوگونی از بافت بیضه بچه ماهیان آزاد دریای خزر با استفاده از روش هضم آنزیمی دو مرحله‌ای جداسازی و از طریق حذف تمایزی خالص سازی شدند. تعلیق سلولی حاوی سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی در محیط کشت حاوی ترکیبی از فاکتور‌های مختلف رشد (bfgf، gdnf، igf i، egf و lif) به مدت چهارده روز کشت داده شدند. مساحت کلونی‌ها در روز چهاردهم در هر گروه اندازه‌گیری شد، همچنین از رنگ‌آمیزی ایمنوفلورسنت برای بررسی کیفی و کمی نشانگر ddx4/vasa در بین گروه‌های مختلف استفاده شد. بیان ژن‌های vasa و gfrα1 به عنوان ژن‌های اختصاصی سلول‌های زایا در گروه‌های مختلف مورد بررسی قرار گرفت. اندازه کلونی‌های اسپرماتوگونی در گروهی که تحت تاثیر چهار فاکتور رشد (bfgf+gdnf+igf 1+egf) قرار داشتند، به طور معنی‌داری بالاتر از سایر گروه‌های آزمایشی بود (0/001>p). با این وجود، در حضور lif، اثر معنی داری بر روی تکثیر سلول‌های اسپرماتوگونی مشاهده نشد. رنگ‌آمیزی ایمنوفلورسنت نشان داد که کلونی‌های سلولی در گروه‌های مختلف برای نشانگر ddx4/vasa مثبت بودند و به جز گروه lif اختلاف معنی‌داری در بین سایر گروه‌ها مشاهده نشد (p>0.05) اختلاف معنی داری در سطح بیان ژنهای vasaو gfrα بین گروههای مختلف آزمایشی مشاهده نشد (p>0.05) بر اساس نتایج حاضر به نظر می رسد افزودن فاکتورهای مختلف رشد نوترکیب انسانی اثر معنی داری بر تکثیر سلولهای اسپرماتوگونی ماهی آزاد دریای خزردر شرایط آزمایشگاهی نداشته باشد.

the effects of growth factors on proliferation،colonization and gene expression of caspian trout spermatogonial stem cells in vitro

the present study aimed to examine the effect of different growth factors on caspian trout spermatogonial cell proliferation،colony formation and germ cell specific gene expression. spermatogonial cells were isolated from testes of juvenile male caspian trout by two enzymatic digestion methods and purified by differential plating technique. the suspended cells containing spermatogonial stem cells were cultured with different growth factors (bfgf،gdnf،igf i،egf and lif) for 14 days. the area of colony was measured in all experimental groups at day 14. also،immunofluorescence staining was used for qualitative and quantitative evaluations of ddx4/vasa positive cells. the expression levels of vasa and gfrα1،as germ cell markers،was assessed in the experimental groups. spermatogonial cells treated with a combination of growth factors bfgf،gdnf،igf 1 and egf had a positive effect on the area of colonies (p< 0.001). however،in the presence of lif،no considerable effect detected on the spermatogonial cell proliferation. immunofluorescence staining showed spermatogonial colonies were positive for germ cell specific marker. with the exception of lif treated group،no significant difference was observed in the number of ddx4/vasa positive spermatogonial cells among the experimental groups (p>0.05). a combination of growth factors did not have detectable effects on the expression levels of vasa and gfrα1 (p>0.05). the findings indicated that recombinant human growth factors has no significant effects on the in vitro proliferation of caspian trout spermatogonia.