بررسی کشت سلول‌های بنیادی اسپرم ساز در شرایط چسبنده و غیر چسبنده

سلول‌های بنیادی اسپرم ساز سلول‌هایی هستند که در غشاء پایه لوله های اسپرم ساز قرار گرفته و قادر به تولید اسپرم در طول حیات مردان میباشند. مطالعات مختلف آزمایشگاهی نشان داد این سلول‌ها بعد از جداسازی از بافت بیضه، تحت شرایط های خاص قادر به کشت هستند. در این مطالعه سلول‌های بیضه موش های نر5-7 روزه نژاد nmriپس از تیمار با آنزیم‌های هضم کننده کلاژناز تیپiv، dnase و دیسپاز، جداسازی شدند. سپس تعداد تقریبی106 سلول در محیط ‌های حاوی فاکتورهای رشد با شرایط کشت چسبنده، روی فیبروبلاست جنینی موش و کشت غیر چسبنده، روی آگارز 1 درصد، کشت داده شدند. نتایج نشان داد سلول‌های بیضوی کشت شده در شرایط غیرچسبنده قادر به تشکیل کلنی‌هایی بوده که همانند کلنی‌های سلول‌های بنیادی اسپرم ساز تشکیل شده در شرایط کشت چسبنده، مارکرهای سلول‌های جنسی را بیان میکنند. مطالعه میکروسکوپ الکترونی کلنی‌ها نشان داد، هر دو نوع کلنی همانند سلول‌های اسپرم ساز واقع در غشاء پایه لوله‌های اسپرم ساز دارای هسته بزرگ اما سیتوپلاسم کوچک می‌باشند. رنگ‌آمیزی ایمونوفلورسانس وجود کلنی‌های β1-integrin، α6-integrin و oct4 مثبت را تایید کرد. آنالیزهای real-time pcr نیز تفاوت معنی‌داری در بیان ژن‌های سلول‌های جنسی این کلنی‌ها با سلول سوماتیکی نشان داد. از طرف دیگر افزایش بیان ki67 در هر دو نوع کلنی با استفاده از بررسی ایمونوسیتوشیمی مشاهده شد که بیانگر خاصیت تکثیرپذیری این قبیل از سلولها است. این نتایج نشان می‌دهد سیستم کشت غیر چسبنده می‌تواند بعنوان یک روش جدید برای کشت کوتاه مدت سلول‌های جنسی مشتق شده از بیضه مورد توجه محققین در تحقیقات بعدی قرار گیرد.